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間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)培養(yǎng)與鑒定方法

 生物學(xué)渣 2021-04-04

相比于胚胎干細(xì)胞或神經(jīng)干細(xì)胞,MSC具有易獲取、易體外培養(yǎng)、傳代穩(wěn)定性、低免疫原性等優(yōu)勢(shì),在體外經(jīng)過(guò)多次傳代后仍具有多向分化和自我復(fù)制的潛能,且MSCs多來(lái)自于成年的組織,研究過(guò)程的道德和倫理學(xué)問(wèn)題較小。

MSC的大小與形狀具有異質(zhì)性,即不同種屬或不同組織的MSC具有不同的生長(zhǎng)形態(tài),例如三極形、長(zhǎng)梭形、小圓形、短梭形和扁平形態(tài)。幾乎所有的MSC都是貼壁生長(zhǎng),具有較強(qiáng)的貼壁能力,而MSC的原代分離也正是利用了MSC強(qiáng)貼壁的特性。例如,骨髓MSC的分離方法為:將從組織中分離出來(lái)的單個(gè)核細(xì)胞懸浮培養(yǎng)于含有FBS的培養(yǎng)基中,1~2天后去除非貼壁細(xì)胞,保留貼壁細(xì)胞再培養(yǎng)2-3周即可獲得。此外也可采用免疫磁珠對(duì)MSC進(jìn)行分選,但這種方法成本較高。

對(duì)于MSC的鑒定,常采用的方式包括形態(tài)學(xué)鑒定,表面標(biāo)志物鑒定和多系分化潛能鑒定。MSC一般呈纖維細(xì)胞樣生長(zhǎng),細(xì)胞在支持物表面呈梭形或不規(guī)則三角形生長(zhǎng),細(xì)胞中央有卵圓形核,胞質(zhì)向外伸出2-3厘米長(zhǎng)短不同的突起。MSC的細(xì)胞表面標(biāo)志物則常采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行鑒定,不同組織來(lái)源的MSCs可共享相同的細(xì)胞表面標(biāo)記,如CD29和CD44。但目前我們對(duì)MSC表面分子標(biāo)志物的研究還不完善,已發(fā)現(xiàn)的表面標(biāo)志物也存在特異性不強(qiáng)的問(wèn)題,為了讓我們更好地分離、培養(yǎng)和鑒定MSC,需進(jìn)一步不斷發(fā)現(xiàn)新的特異性標(biāo)志物。

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