免疫診斷（immunodiagnosis）是應(yīng)用免疫學(xué)的理論、技術(shù)和方法診斷各種疾病和測(cè)定免疫狀態(tài)。目前免疫診斷的平臺(tái)和方法有多種多樣，但是都基于相同或相似的原理。這里就整理免疫診斷的5大基本原理供大家回顧。 1、雙抗體夾心 
原理：雙抗體夾心法是檢測(cè)抗原最常用的方法，雙抗體夾心法適用于測(cè)定擁有至少兩個(gè)表位的大分子抗原。不適用于測(cè)定半抗原及小分子單價(jià)抗原，不能形成兩位點(diǎn)夾心。 應(yīng)用場(chǎng)景：絕大多數(shù)檢測(cè)蛋白都可以使用雙抗體夾心法。有些抗體檢測(cè)項(xiàng)目，如總IgE檢測(cè)。 注意事宜：1）在一步法，待測(cè)抗原與標(biāo)記抗體一起加入反應(yīng)中，當(dāng)標(biāo)本中受檢抗原的含量很高時(shí)，過(guò)量抗原會(huì)分別和固相包被抗體及標(biāo)記抗體結(jié)合，不會(huì)形成“夾心復(fù)合物”就出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)，導(dǎo)至結(jié)果偏低或者甚至可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。2）HAMA效應(yīng)和類(lèi)風(fēng)濕因子（RF）的干擾。 2、雙抗原夾心 
原理：雙抗原夾心法的反應(yīng)模式與雙抗體夾心法類(lèi)似。用特異性抗原進(jìn)行包被和標(biāo)記。 有研究表明，雙抗原夾心法檢測(cè)抗體的靈敏度和準(zhǔn)確性要抗體檢測(cè)使用的間接法（檢測(cè)抗體更為常用的一種方法）。 應(yīng)用場(chǎng)景：理論上，檢測(cè)抗體的項(xiàng)目均可使用，如乙肝表面蛋白抗體檢測(cè)。待檢抗體IgG的兩個(gè)Fab需要分別同固相包被抗原和標(biāo)記抗原同時(shí)結(jié)合。 注意事宜：抗原標(biāo)記過(guò)程可能導(dǎo)至蛋白構(gòu)象變化，需要尋找最適合的標(biāo)記物和標(biāo)記方法。 3、間接法 
原理：間接法是檢測(cè)抗體常用的方法。其原理為利用標(biāo)記的抗抗體，俗稱(chēng)二抗，來(lái)檢測(cè)與固相包被抗原結(jié)合的受檢抗體。本法主要用于對(duì)病原體抗體的檢測(cè)而進(jìn)行傳染病的診斷。 應(yīng)用場(chǎng)景：所有的IgG抗體檢測(cè)都可以使用。如新冠血清IgG檢測(cè)。 注意事宜：本方法的優(yōu)點(diǎn)是只要變換包被抗原的種類(lèi)就可利用同一標(biāo)記抗抗體（二抗）建立檢測(cè)相應(yīng)抗體的方法。 4、競(jìng)爭(zhēng)法 
原理：當(dāng)小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個(gè)表位供包被和檢測(cè)抗體同時(shí)識(shí)別結(jié)合，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定，可以采用競(jìng)爭(zhēng)法模式。由于物質(zhì)的相互作用或者結(jié)合是相對(duì)動(dòng)態(tài)平衡的過(guò)程，一旦樣本中存在待檢測(cè)物，樣品中的待檢測(cè)物會(huì)同試劑中的標(biāo)記物去競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合包被物。這樣就是導(dǎo)至原來(lái)結(jié)合在一起的包被物和標(biāo)記物分離，使原本飽滿(mǎn)的信號(hào)值進(jìn)行降低。信號(hào)降低的程度同待檢測(cè)物的濃度成正相關(guān)。 應(yīng)用場(chǎng)景：小分子抗原或半抗原，如激素檢測(cè)，雌二醇，睪酮；甲狀腺功能檢測(cè)，T4，T3等。 注意事宜：競(jìng)爭(zhēng)法中，有些待檢測(cè)物分子特別小，很難制備或找到適合使用的抗體，而且生理?xiàng)l件下可以同其他蛋白結(jié)合，那么可以使用該分子的結(jié)合蛋白來(lái)代替抗體實(shí)現(xiàn)。如，25OH-Vd檢測(cè)，可使用25OH-Vd特異性抗體，也可使用Vd結(jié)合蛋白。 5、捕獲法（反向間接法）
原理：捕獲包被法，又稱(chēng)為反向間接法，采用抗抗體（二抗）包被，抗原進(jìn)行標(biāo)記的檢測(cè)方法。以目前最常用的IgM測(cè)定為例，因血清中針對(duì)某種抗原的特異性IgM和IgG同時(shí)存在，則后者可干擾IgM的測(cè)定。因此先將所有血清IgM（包括異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再測(cè)定特異性IgM。 應(yīng)用場(chǎng)景：IgM測(cè)定最為常見(jiàn)，特定過(guò)敏原IgE檢測(cè)。 注意事宜：IgM型類(lèi)風(fēng)濕因子（RF）的干擾，IgE型類(lèi)風(fēng)濕因子相對(duì)較少。 | 
