首先，小魚將史上最全的細胞增殖檢測技術分享給大家

1、直接計數法

2、³H-TdR滲入法

3、Brdu/EdU檢測法

Brdu&EdU均是胸腺嘧啶的衍生物，均可代替胸腺嘧啶在DNA合成期摻入細胞中。

不同的是，Brdu檢測法可利用Brdu專一性抗體和其他細胞標記物對細胞進行雙重染色，可判斷增殖細胞的種類及增殖速度，不僅適用于體外實驗也能用于活體實驗。這個方法最大的缺點需要變性DNA才能與抗體結合，破壞了DNA雙鏈結構，導致染色彌散、準確性降低等問題。

EdU檢測法則基于EdU與Apollo熒光染料的特異性反應檢測DNA復制活性，適用于細胞增殖、細胞標記示蹤等方面的研究，尤其適合進行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他藥物的篩選實驗。EdU檢測染料只有BrdU抗體大小的1/500,在細胞內很容易就擴散，無需DNA變性。

4、MTT檢測法&CCK8檢測法

MTT檢測法反映細胞的能量代謝，是檢測細胞增殖活力的一種簡便準確方法。其原理是在活細胞生長和增殖過程中，線粒體內的脫氫酶可將黃色的MTT分解為藍紫色的水不溶性的甲瓚（Formazan），并沉積在細胞中，死細胞無此功能。DMSO溶解細胞中的紫色結晶物，用酶聯(lián)檢測儀在490nm波長處檢測其光密度值，可間接反映活細胞數量。

CCK8是MTT的升級版，CCK-8細胞活性檢測試劑中含有WST-8（MTT的類似物），在電子耦合試劑存在的情況下，可被線粒體中的脫氫酶還原成橙黃色的甲瓚（Formazan），用酶聯(lián)檢測儀在450nm波長處檢測其光密度值，可間接反映活細胞數量。

細胞增殖越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。

5、CFSE檢測法

CFSE是一種可穿透細胞膜的熒光染料，可逆的與細胞內的氨基結合偶聯(lián)到細胞蛋白質上，是種良好的細胞標記物。當細胞分裂時，CFSE標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，因此CFSE熒光強度呈對逐級遞減，可利用流式細胞儀對其進行分析。

6、核抗原Ki-67染色法

Ki-67是目前較為肯定的核增殖標志物，它只參與增殖細胞核反應，其表達增強是細胞有絲分裂、增殖活性增強的一個可靠標記，研究表明Ki-67的表達能可靠而迅速的反應惡性腫瘤的增值率。

細胞凋亡視頻：

一 形態(tài)學檢測

1、通過光學顯微鏡或倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)。

1)未染色細胞

凋亡細胞的體積變小、變形，細胞膜完整但出現發(fā)泡現象，細胞凋亡晚期可見凋亡小體。貼壁細胞出現皺縮、變圓、脫落。

2)染色細胞

常用吉姆薩染色、瑞氏染色等，凋亡細胞的染色質濃縮、邊緣化，核膜裂解、染色質分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài)。

2、通過熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡觀察細胞形態(tài)

以細胞核染色質的形態(tài)學改變?yōu)橹笜藖碓u判細胞凋亡的進展情況。該法中常用的DNA特異性染料有：Hoechst 33342, Hoechst 33258,DAPI。三種染料與DNA的結合是非嵌入式的，主要結合在DNA的A-T堿基區(qū)。紫外光激發(fā)時發(fā)射明亮的藍色熒光。

細胞凋亡中細胞核染色質的形態(tài)學改變分為三期：I期的細胞核呈波紋狀或折縫樣，部分染色質出現濃縮狀態(tài)；II a期細胞核的染色質高度凝聚、邊緣化；II b期的細胞核裂解為碎塊，產生凋亡小體。

3、通過透射電子顯微鏡觀察細胞形態(tài)

凋亡細胞體積變小，表面微絨毛消失，細胞質濃縮。

凋亡I期（pro-apoptosis nuclei）的細胞核內染色質高度盤繞，出現許多稱為氣穴現象的空泡結構；II a期細胞核的染色質高度凝聚、邊緣化；細胞凋亡的晚期，細胞核裂解為碎塊，產生凋亡小體。

二 Annexin V/PI 染色

凋亡細胞的細胞表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸（PS）從細胞膜內轉移到細胞膜外，使PS暴露在細胞膜外表面。

三 DNA的片段化

四 Tunel檢測法

細胞凋亡中，染色體DNA雙鏈或單鏈斷裂而產生大量的粘性3’-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標記到3’-OH末端，從而可進行凋亡細胞的檢測。

五 線粒體膜電位

因而，線粒體跨膜電位的存在，使一些親脂性陽離子熒光染料如Rhodamine123、JC-1、TMRM等可接合到線粒體基質，其熒光的增強或減弱說明線粒體內膜電負性的增高或降低。

六 細胞色素C釋放

七 Caspase 活性檢測

Caspase家族在凋亡信號轉導的許多途徑中發(fā)揮功能。

Caspase-3正常以酶原（32kD）的形式存在于胞漿中，在凋亡早期階段被激活，活化的Caspase-3由兩個大亞基（17kD）和兩個小亞基（12kD）組成，裂解相應的胞漿胞核底物，最終導致細胞凋亡，但在細胞凋亡的晚期和死亡細胞，caspase-3的活性明顯下降。

八 凋亡相關蛋白檢測

綜上，小魚總結了細胞凋亡分析總體原則：

• 凋亡是多因素、多通路參與的過程，不能根據單一指標來判斷細胞凋亡；需多指標同時檢測。
  

• 凋亡細胞不同時間出現的凋亡事件不同，而每個指征維持一段時間，則需要在不同的時間點進行采樣，以保證檢測結果的準確性

• 實驗需設定陽性＆陰性對照，避免出現假陽性或假陰性。