張露，李凡，回天立，任國(guó)勝

重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院　

　　近年來(lái)，乳腺癌在全球范圍內(nèi)發(fā)病率呈逐年遞增趨勢(shì)。乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多病因、多步驟的過(guò)程，與癌基因的激活和抑癌基因的失活密切相關(guān)。PHF2位于9q22.31，是Jmjc家族的成員之一，其通過(guò)使組蛋白賴氨酸的去甲基化，調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄。PHF2在頭頸部腫瘤、結(jié)腸癌、胃癌等多種惡性腫瘤中低表達(dá)，提示PHF2可能是抑癌基因，對(duì)腫瘤發(fā)生、發(fā)展起負(fù)向調(diào)控作用。目前PHF2在乳腺癌中的研究尚處于起步階段，在乳腺癌中的表達(dá)及具體作用尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本文旨在探討PHF2在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義，為臨床及病理醫(yī)師提供有用價(jià)值。

　　目的：探討PHF2在乳腺癌細(xì)胞和組織中的表達(dá)及其與乳腺癌臨床病理特征、預(yù)后的關(guān)系。

　　方法：采用qRT-PCR法檢測(cè)乳腺癌及正常乳腺上皮細(xì)胞株（n=7）及配對(duì)的癌旁組織（n=30）中PHF2 mRNA的表達(dá)水平；應(yīng)用蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞株中PHF2蛋白的表達(dá)水平，免疫組化法檢測(cè)乳腺癌組織（n=50）和癌旁組織（n=15）中PHF2蛋白的表達(dá)，分析PHF2表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系及預(yù)后的關(guān)系。

　　結(jié)果：與正常人乳腺上皮細(xì)胞相比，PHF2 mRNA和蛋白在乳腺癌細(xì)胞株中表達(dá)下調(diào)（P＜0.01）；與癌旁組織相比，PHF2 mRNA在90%（27/30）的乳腺癌組織中表達(dá)下調(diào)（P＜0.05）；免疫組化結(jié)果顯示：在70%（35/50）的乳腺癌組織中PHF2蛋白表達(dá)下調(diào)（P＜0.05）；PHF2表達(dá)下調(diào)與乳腺癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER陰性及預(yù)后密切相關(guān)（P＜0.05）。

　　結(jié)論：PHF2在乳腺癌中表達(dá)下調(diào)，可以作為乳腺癌預(yù)后判斷的指標(biāo)之一，有望成為乳腺癌治療的新靶點(diǎn)。

　　乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展是多病因、多步驟的過(guò)程，主要受遺傳和非遺傳因素的影響。從遺傳學(xué)角度而言，抑癌基因的失活和癌基因的激活與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。人類9號(hào)染色體長(zhǎng)臂2區(qū)2帶（9q22）在多種惡性腫瘤中有不同程度的缺失，提示該區(qū)段包括一系列的抑癌基因（如FANCC、PHF2、XPA、PTCH1等）。PHF2位于9q22.31，由PHD鋅指結(jié)構(gòu)域和Jmjc區(qū)域共同構(gòu)成，屬于KDM7（Jmjc的亞家族）家族成員之一，KDM7包括KDM7A（KIAA1718）、KDM7B（PHF8）、KDM7C（PHF2）三個(gè)成員。研究顯示PHF8和KIAA1718與大腦的發(fā)育密切相關(guān)，它們可以通過(guò)使H3K9Me2、H3K27Me2、H4K20Me1去甲基化，進(jìn)而調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)。PHF2在ARID5B的協(xié)助下也參與組蛋白賴氨酸的去甲基化（如H3K9Me2、H4K20Me1），從而促進(jìn)靶基因的轉(zhuǎn)錄。另外，PHF2可以結(jié)合到rDNA啟動(dòng)子處的H3K4Me3，從而促進(jìn)rDNA的表達(dá)。例如PHF2通過(guò)使組蛋白賴氨酸去甲基化的方式激活相關(guān)靶基因的轉(zhuǎn)錄，從而促進(jìn)與脂肪的形成和NF-κB通路炎癥相關(guān)因子的表達(dá)。本組實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PHF2在乳腺癌中的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與配對(duì)癌旁組織比較，PHF2 mRNA在90%的乳腺癌組織中表達(dá)下調(diào)；同時(shí)，PHF2蛋白在70%的乳腺癌組織中表達(dá)下調(diào)，與之前PHF2在結(jié)腸癌、胃癌、頭頸部腫瘤組織中呈不同程度低表達(dá)的研究結(jié)果相似。提示PHF2表達(dá)的下調(diào)參與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展，可能是乳腺癌的抑癌基因。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否對(duì)于乳腺癌的預(yù)后有重要意義。乳腺癌中出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，提示腫瘤的惡性程度高；轉(zhuǎn)移、侵襲能力強(qiáng)，患者的預(yù)后差、總生存率低。本組實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PHF2蛋白水平表達(dá)的下調(diào)與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)；這可能是由于下調(diào)的PHF2減弱甚至失去了抑制乳腺癌惡性進(jìn)展的作用，從而使腫瘤遷移、侵襲、轉(zhuǎn)移等惡性特征的程度加強(qiáng)、進(jìn)程加快。ER陰性的乳腺癌往往為非激素依賴型，該類患者內(nèi)分泌治療不敏感，預(yù)后較差。本組實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PHF2蛋白水平的降低與ER陰性有關(guān)，提示PHF2表達(dá)下調(diào)或缺失在非激素依賴型乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中起特殊作用，還需進(jìn)一步分析。同時(shí)，我們用在線數(shù)據(jù)庫(kù)KMPLOT分析PHF2的表達(dá)與乳腺癌患者預(yù)后關(guān)系，結(jié)果顯示：PHF2的表達(dá)水平與患者預(yù)后有關(guān)，在PHF2低表達(dá)組乳腺癌患者預(yù)后較高表達(dá)組差。這與之前在頭頸部腫瘤中報(bào)道PHF2表達(dá)的下調(diào)與患者預(yù)后關(guān)系相似。上述結(jié)果顯示PHF2表達(dá)的下調(diào)與腫瘤進(jìn)展密切相關(guān)，可作為判斷乳腺癌患者預(yù)后的指標(biāo)之一。最近研究發(fā)現(xiàn)，在結(jié)腸癌中PHF2通過(guò)使p53下游靶基因p21啟動(dòng)子處的H3K9Me2去甲基化，從而發(fā)揮PHF2介導(dǎo)的p53凋亡信號(hào)通路對(duì)腫瘤發(fā)生、發(fā)展的抑制作用。目前，PHF2在乳腺癌中作用機(jī)制尚未明確，其是否通過(guò)p53、p21發(fā)揮抑癌作用尚不清楚。因此，我們還將進(jìn)一步探索PHF2通過(guò)何種信號(hào)通路對(duì)乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及生物學(xué)行為產(chǎn)生影響。

　　總之，本組實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PHF2在乳腺癌中表達(dá)明顯下調(diào)，并與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER陰性及預(yù)后密切相關(guān)；PHF2可能是乳腺癌的抑癌基因，可作為乳腺癌預(yù)后判斷的指標(biāo)之一，有望成為乳腺癌治療的潛在新靶點(diǎn)。