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白細(xì)胞介素6（IL-6）檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 一、用途 本試劑盒用于體外定量檢測人血清、血漿、精液或細(xì)胞培養(yǎng)液等中的IL-6的含量。 二、原理 本試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）。采用兩株識(shí)別不同表位的抗IL-6單克隆抗體，其中一株作為包被抗體，以識(shí)別和結(jié)合待檢標(biāo)本中的IL-6，另一株作為酶標(biāo)抗體，與結(jié)合于包被抗體的IL-6的另一表位結(jié)合，并催化底物顯色，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待檢標(biāo)本中IL-6的含量。 三、試劑盒提供 1. IL-6預(yù)包被板 96T 2. 酶標(biāo)抗體 １支 3. 標(biāo)準(zhǔn)品 6支（2.5ng/ml，1.25 ng/ml，0.625 ng/ml，0.312 ng/ml，0.156 ng/ml，0.078 ng/ml各1支） 4. 樣本（精液）稀釋液 1支（僅使用精液樣本實(shí)驗(yàn)時(shí)提供） 5. 陰性對(duì)照 1支 6. 顯色劑Ａ，Ｂ液 各１支 7. 終止液 １支 8. 說明書 1份 9. 30X濃縮洗滌液 1瓶(20ml，加蒸餾水1：30稀釋使用) 10. 坐標(biāo)紙 1張 四、樣品收集、處理與保存 1、細(xì)胞培養(yǎng)上清液：1000xg離心10分鐘去除顆粒和聚合物。 2、血清：操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱源和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000xg離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 3、血漿：EDTA，檸檬酸鹽和肝素血漿可用于檢測。1000xg離心30分鐘去除顆粒。 4、精液：首先室溫放置1小時(shí)，然后取上清使用試劑盒中提供的樣本稀釋液處理樣本。 5、保存：如果樣本不直接使用，將其分為小部分（250~500 ul）－70℃下保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能不要使用溶血或高脂血。如果血清中有大量顆粒，檢測前先離心或過濾。 注意：不要在37℃或更高溫度加熱解凍。在室溫下解凍并確保樣本均勻地充分解凍。 五、操作步驟 1. 將試劑盒平衡至室溫后取出反應(yīng)板拆封后于板架上。 2. 加待檢標(biāo)本：加待檢樣本（如果是精液樣本實(shí)驗(yàn)，則需使用樣本稀釋液1：1稀釋，然后加樣100ul /孔）、陰性對(duì)照及標(biāo)準(zhǔn)品，100ul /孔，37℃，1h。（6個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品按濃度由高至低依次加入）。 3. 加酶標(biāo)抗體：洗板3次，加入酶標(biāo)抗體100ul /孔，37℃，1h。 4. 顯色：洗板3次，加入顯色劑Ａ，Ｂ液各１滴（50ul），37℃顯色10min。 六、結(jié)果判斷 1．目測：在白色背景下觀察各孔顯色情況，蘭色者為陽性，無色者為陰性。 2．酶標(biāo)儀測定：每孔加終止液一滴（50ul），混勻后在450nm下測定各孔O.D值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品OD值為Y軸，相應(yīng)的IL-6標(biāo)準(zhǔn)品濃度為X軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待檢標(biāo)本中IL-6的含量。 七、局限 2.5ng/ml以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到精確的結(jié)果。大于2.5ng/ml IL-6的樣本應(yīng)將樣本稀釋后重做。在結(jié)果分析時(shí)，結(jié)合考慮相應(yīng)的稀釋度。 八、試劑盒性能 1. 靈敏度：最小的IL-6檢測濃度小于10pg/ml。 2. 特異性：不與人其他細(xì)胞因子反應(yīng)。 3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均＜10%。 4. 本實(shí)驗(yàn)室測定正常人結(jié)果為＜10pg/ml。受各種因素影響（人群，實(shí)驗(yàn)室條件等），各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己 的正常值。 九、注意事項(xiàng) 1．孔板須密封防潮，從冷藏環(huán)境中取出時(shí)，應(yīng)置室溫平衡至潮氣盡干后方可開啟使用，余者封存置2-8℃。 2．滴加試劑前應(yīng)將液體翻轉(zhuǎn)數(shù)次混勻，滴加時(shí)保持瓶身垂直。 3．洗滌時(shí)每孔均須加滿，防止孔內(nèi)有游離酶不能洗凈。 4．試劑置2-8℃存放，不能凍結(jié)，有效期10個(gè)月。 5．不同批號(hào)不要混用。 6．加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)孔的孵育時(shí)間一致。 7．嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。 白細(xì)胞介素8（IL-8）檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 一、用途 本試劑盒用于體外定量檢測人血清、血漿、精液或細(xì)胞培養(yǎng)液等中的IL-8的含量。 二、原理 本試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）。采用兩株識(shí)別不同表位的抗IL-8單克隆抗體，其中一株作為包被抗體，以識(shí)別和結(jié)合待檢標(biāo)本中的IL-8，另一株作為酶標(biāo)抗體，與結(jié)合于包被抗體的IL-8的另一表位結(jié)合，并催化底物顯色，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待檢標(biāo)本中IL-8的含量。 三、試劑盒提供 1. IL-8預(yù)包被板 96T 2. 酶標(biāo)抗體 １支 3. 標(biāo)準(zhǔn)品 6支（5ng/ml，2.5 ng/ml，1.25 ng/ml，0.625 ng/ml，0.312 ng/ml，0.156 ng/ml各1支） 4. 樣本（精液）稀釋液 1支（僅使用精液樣本實(shí)驗(yàn)時(shí)提供） 5. 陰性對(duì)照 1支 6. 顯色劑Ａ，Ｂ液 各１支 7. 終止液 １支 8. 說明書 1份 9. 30X濃縮洗滌液 1瓶(20ml，加蒸餾水1：30稀釋使用) 10. 坐標(biāo)紙 1張 四、樣品收集、處理與保存 1、細(xì)胞培養(yǎng)上清液：1000xg離心10分鐘去除顆粒和聚合物。 2、血清：操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱源和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000xg離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 3、血漿：EDTA，檸檬酸鹽和肝素血漿可用于檢測。1000xg離心30分鐘去除顆粒。 4、精液：首先室溫放置1小時(shí)，然后取上清使用試劑盒中提供的樣本稀釋液處理樣本。 5、保存：如果樣本不直接使用，將其分為小部分（250~500 ul）－70℃下保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能不要使用溶血或高脂血。如果血清中有大量顆粒，檢測前先離心或過濾。 注意：不要在37℃或更高溫度加熱解凍。在室溫下解凍并確保樣本均勻地充分解凍。 五、操作步驟 1. 將試劑盒平衡至室溫后取出反應(yīng)板拆封后于板架上。 2. 加待檢標(biāo)本：加待檢樣本（如果是精液樣本實(shí)驗(yàn)，則需使用樣本稀釋液1：1稀釋，然后加樣100ul /孔）、陰性對(duì)照及標(biāo)準(zhǔn)品，100ul /孔，37℃，1h。（6個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品按濃度由高至低依次加入）。 3. 加酶標(biāo)抗體：洗板3次，加入酶標(biāo)抗體100ul /孔，37℃，1h。 4. 顯色：洗板3次，加入顯色劑Ａ，Ｂ液各１滴（50ul），37℃顯色10min。 六、結(jié)果判斷 1．目測：在白色背景下觀察各孔顯色情況，蘭色者為陽性，無色者為陰性。 2．酶標(biāo)儀測定：每孔加終止液一滴（50ul），混勻后在450nm下測定各孔O.D值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品OD值為Y軸，相應(yīng)的IL-8標(biāo)準(zhǔn)品濃度為X軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待檢標(biāo)本中IL-8的含量。 七、局限 5ng/ml以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到精確的結(jié)果。大于5ng/ml IL-8的樣本應(yīng)將樣本稀釋后重做。在結(jié)果分析時(shí)，結(jié)合考慮相應(yīng)的稀釋度。 八、試劑盒性能 1. 靈敏度：最小的IL-8檢測濃度小于0.156ng/ml。 2. 特異性：不與人其他細(xì)胞因子反應(yīng)。 3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均＜10%。 4. 本實(shí)驗(yàn)室測定正常人結(jié)果為＜0.156ng/ml。受各種因素影響（人群，實(shí)驗(yàn)室條件等），各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立 自己的正常值。 九、注意事項(xiàng) 1．孔板須密封防潮，從冷藏環(huán)境中取出時(shí)，應(yīng)置室溫平衡至潮氣盡干后方可開啟使用，余者封存置2-8℃。 2．滴加試劑前應(yīng)將液體翻轉(zhuǎn)數(shù)次混勻，滴加時(shí)保持瓶身垂直。 3．洗滌時(shí)每孔均須加滿，防止孔內(nèi)有游離酶不能洗凈。 4．試劑置2-8℃存放，不能凍結(jié)，有效期10個(gè)月。 5．不同批號(hào)不要混用。 6．加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)孔的孵育時(shí)間一致。 7．嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。 白細(xì)胞介素10（IL-10）檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 一、用途 本試劑盒用于體外定量檢測人血清、血漿、精液、緩沖液或細(xì)胞培養(yǎng)液等中的IL-10的含量。 二、原理 本試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）。采用抗IL-10特異多克隆抗體包被微孔板，已知IL-10濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣本、對(duì)照樣本和未知樣本加入微孔內(nèi)進(jìn)行檢測。先將IL-10抗原和生物素標(biāo)記的抗IL-10特異單克隆抗體同時(shí)孵育。洗滌后，加入親和素過氧化物酶。再經(jīng)過孵育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入酶復(fù)合物的作用底物，產(chǎn)生顏色反應(yīng)。顏色的深淺和樣本中IL-10的濃度呈比例關(guān)系。 三、試劑盒提供 1. IL-10預(yù)包被板 96T 2. 標(biāo)準(zhǔn)品 2支 3. 標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液 1支 4. 生物素標(biāo)記抗IL-10抗體 1支 5. 生物素標(biāo)記抗體稀釋液 1支 6. 親和鏈霉素-HRP 2支 7. HRP稀釋液 1支 8. 樣本（精液）稀釋液 1支（僅使用精液樣本實(shí)驗(yàn)時(shí)提供） 9. TMB １支 10. 終止液 １支 11. 說明書 1份 12. 洗滌緩沖液 1瓶(10ml，加蒸餾水100倍稀釋使用) 四、樣品收集、處理與保存 1、細(xì)胞培養(yǎng)上清液：1000xg離心10分鐘去除顆粒和聚合物。 2、血清：操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱源和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000xg離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 3、血漿：EDTA，檸檬酸鹽和肝素血漿可用于檢測。1000xg離心30分鐘去除顆粒。 4、精液：首先室溫放置1小時(shí)，然后取上清使用試劑盒中提供的樣本稀釋液處理樣本。 5、保存：如果樣本不直接使用，將其分為小部分（250~500 ul）－70℃下保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能不要使用溶血或高脂血。如果血清中有大量顆粒，檢測前先離心或過濾。 注意：1、不要在37℃或更高溫度加熱解凍。在室溫下解凍并確保樣本均勻地充分解凍。 2、96T的試劑盒最多分兩次做完，48T的試劑盒一次做完。 五、試劑的準(zhǔn)備 1. 標(biāo)準(zhǔn)品：按標(biāo)簽說明進(jìn)行說明，稀釋后濃度為400pg/ml IL-10。標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋須在試驗(yàn)前準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品輕輕震蕩5分鐘。標(biāo)準(zhǔn)品稀釋方案：400 pg/ml，200 pg/ml，100 pg/ml，50 pg/ml，25 pg/ml，12.5 pg/ml。 2. 生物素標(biāo)記抗IL-10的稀釋：每次實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備。根據(jù)實(shí)驗(yàn)的孔數(shù)，以生物素標(biāo)記抗體稀釋液稀釋。稀釋量見下表。
3. 親和鏈霉素-HRP的稀釋：5 ul親和鏈霉素-HRP加入0.5ml HRP稀釋液，每次實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備，不要保存此稀釋后液體。根據(jù)反應(yīng)孔的數(shù)量進(jìn)一步稀釋，見下表。
4. 洗滌緩沖液（100倍）的稀釋：蒸餾水100倍稀釋。 六、操作步驟 1. 試劑盒平衡至室溫后取出反應(yīng)板拆封后于板架上。 2. 加待檢標(biāo)本：加待檢樣本（如果是精液樣本實(shí)驗(yàn)，則需使用樣本稀釋液1：1稀釋，然后加樣100 ul /孔）、標(biāo)準(zhǔn)品，100 ul /孔（6個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品按濃度由高至低依次加入）?？瞻讓?duì)照孔加100 ul標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液。 3. 各孔加入50 ul稀釋的生物素標(biāo)記抗IL-10，蓋上板蓋，室溫（18~25℃）下孵育2小時(shí)。 4. 洗板：吸去孔中的液體，加入0.3ml洗滌液；等待1分鐘后吸去洗滌液。重復(fù)此過程3次。 5. 每孔中加入100 ul稀釋的親和鏈霉素-HRP，蓋上板蓋，室溫（18~25℃）下孵育20分鐘。 6. 洗板：步驟同步驟4。 7. 顯色：每孔加入100 ul TMB底物液，室溫（18~25℃）下避光孵育10~20分鐘。 七、結(jié)果判斷 酶標(biāo)儀測定：每孔加終止液一滴，混勻后在450nm下測定各孔O.D值（620nm波長作為參考波長）。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品OD值為Y軸，相應(yīng)的IL-10標(biāo)準(zhǔn)品濃度為X軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待檢標(biāo)本中IL-10的含量。 八、局限 400pg/ml以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到精確的結(jié)果。大于400pg/ml IL-10的樣本應(yīng)以標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液稀釋后重做。在結(jié)果分析時(shí)，結(jié)合考慮相應(yīng)的稀釋度。 九、試劑盒性能 1. 靈敏度：最小的IL-10檢測濃度小于5pg/ml。稀釋度的線性：將含有1000pg/ml IL-10的人血清用標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液系列稀釋。樣本線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)為0.99。 2. 特異性：不與人其他細(xì)胞因子反應(yīng)。與猿的IL-10發(fā)生交叉反應(yīng)；濾過性毒素的IL-10無干擾。 3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均〈10%。 4. 本實(shí)驗(yàn)室測定正常人結(jié)果為＜5pg/ml。受各種因素影響（人群，實(shí)驗(yàn)室條件等），各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己 的正常值。 十、注意事項(xiàng) 1．孔板須密封防潮，從冷藏環(huán)境中取出時(shí)，應(yīng)置室溫平衡至潮氣盡干后方可開啟使用，余者封存置2-8℃。 2．滴加試劑前應(yīng)將液體翻轉(zhuǎn)數(shù)次混勻，滴加時(shí)保持瓶身垂直。 3．洗滌時(shí)每孔均須加滿，防止孔內(nèi)有游離酶不能洗凈。 4．試劑置2-8℃存放，不能凍結(jié)，有效期10個(gè)月。 5．不同批號(hào)不要混用。 6．加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)孔的孵育時(shí)間一致。 7．嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。 檢測總過程（2小時(shí)35分鐘）
法國DIACLONE公司監(jiān)制并提供包被抗體、標(biāo)準(zhǔn)品、生物素二抗、酶標(biāo)和底物 白細(xì)胞介素2（IL-2）檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 一、用途 本試劑盒用于體外定量檢測人血清、血漿、精液或細(xì)胞培養(yǎng)液等中的IL-2的含量。 二、原理 本試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）。采用抗IL-2特異多克隆抗體包被微孔板，已知IL-2濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣本、對(duì)照樣本和未知樣本加入微孔內(nèi)進(jìn)行檢測。先將IL-2抗原和生物素標(biāo)記的抗IL-2特異單克隆抗體同時(shí)孵育。洗滌后，加入親和素過氧化物酶。再經(jīng)過孵育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入酶復(fù)合物的作用底物，產(chǎn)生顏色反應(yīng)。顏色的深淺和樣本中IL-2的濃度呈比例關(guān)系。 三、試劑盒提供 1. IL-2預(yù)包被板 96T 2. 標(biāo)準(zhǔn)品 2支 3. 標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液 1支 4. 生物素標(biāo)記抗IL-2抗體 1支 5. 生物素標(biāo)記抗體稀釋液 1支 6. 親和鏈霉素-HRP 2支 7. HRP稀釋液 1支 8. 樣本（精液）稀釋液 1支（僅使用精液樣本實(shí)驗(yàn)時(shí)提供） 9. TMB １支 10. 終止液 １支 11. 說明書 1份 12. 洗滌緩沖液 1瓶(10ml，加蒸餾水100倍稀釋使用) 四、樣品收集、處理與保存 1、細(xì)胞培養(yǎng)上清液：1000xg離心10分鐘去除顆粒和聚合物。 2、血清：操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱源和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000xg離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 3、血漿：EDTA，檸檬酸鹽和肝素血漿可用于檢測。1000xg離心30分鐘去除顆粒。 4、精液：首先室溫放置1小時(shí)，然后取上清使用試劑盒中提供的樣本稀釋液處理樣本。 5、保存：如果樣本不直接使用，將其分為小部分（250~500 ul）－70℃下保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能不要使用溶血或高脂血。如果血清中有大量顆粒，檢測前先離心或過濾。 注意：1、不要在37℃或更高溫度加熱解凍。在室溫下解凍并確保樣本均勻地充分解凍。 2、96T的試劑盒最多分兩次做完，48T的試劑盒一次做完。 五、試劑的準(zhǔn)備 1. 標(biāo)準(zhǔn)品：按標(biāo)簽說明進(jìn)行說明，稀釋后濃度為1000pg/ml IL-2。標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋須在試驗(yàn)前準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品輕輕震蕩5分鐘。標(biāo)準(zhǔn)品稀釋方案：1000 pg/ml，500 pg/ml，250 pg/ml，125pg/ml，62.5 pg/ml，31.25 pg/ml。 2. 生物素標(biāo)記抗IL-2的稀釋：每次實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備。根據(jù)實(shí)驗(yàn)的孔數(shù)，以生物素標(biāo)記抗體稀釋液稀釋。稀釋量見下表。
3. 親和鏈霉素-HRP的稀釋：5 ul親和鏈霉素-HRP加入0.5ml HRP稀釋液，每次實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備，不要保存此稀釋后液體。根據(jù)反應(yīng)孔的數(shù)量進(jìn)一步稀釋，見下表。
4. 洗滌緩沖液（100倍）的稀釋：蒸餾水100倍稀釋。 六、操作步驟 1. 試劑盒平衡至室溫后取出反應(yīng)板拆封后于板架上。 2. 加待檢標(biāo)本：加待檢樣本（如果是精液樣本實(shí)驗(yàn)，則需使用樣本稀釋液1：1稀釋，然后加樣100 ul /孔）、標(biāo)準(zhǔn)品，100 ul /孔（6個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品按濃度由高至低依次加入）?？瞻讓?duì)照孔加100 ul標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液。 3. 各孔加入50 ul稀釋的生物素標(biāo)記抗IL-2，蓋上板蓋，室溫（18~25℃）下孵育1小時(shí)。 4. 洗板：吸去孔中的液體，加入0.3ml洗滌液；等待1分鐘后吸去洗滌液。重復(fù)此過程3次。 5. 每孔中加入100 ul稀釋的親和鏈霉素-HRP，蓋上板蓋，室溫（18~25℃）下孵育20分鐘。 6. 洗板：步驟同步驟4。 7. 顯色：每孔加入100 ul TMB底物液，室溫（18~25℃）下避光孵育10~20分鐘。 七、結(jié)果判斷 酶標(biāo)儀測定：每孔加終止液100 ul，混勻后在450nm下測定各孔O.D值（620nm波長作為參考波長）。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品OD值為Y軸，相應(yīng)的IL-2標(biāo)準(zhǔn)品濃度為X軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待檢標(biāo)本中IL-2的含量。 八、局限 1000pg/ml以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到精確的結(jié)果。大于1000pg/ml IL-2的樣本應(yīng)以標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液稀釋后重做。在結(jié)果分析時(shí)，結(jié)合考慮相應(yīng)的稀釋度。 九、試劑盒性能 1. 靈敏度：最小的IL-2檢測濃度小于10pg/ml。稀釋度的線性：將含有1000pg/ml IL-2的人血清用標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液系列稀釋。樣本線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)為0.99。 2. 特異性：不與人其他細(xì)胞因子反應(yīng)。與猿的IL-2發(fā)生交叉反應(yīng)。 3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均〈10%。 十、注意事項(xiàng) 1．孔板須密封防潮，從冷藏環(huán)境中取出時(shí)，應(yīng)置室溫平衡至潮氣盡干后方可開啟使用，余者封存置2-8℃。 2．滴加試劑前應(yīng)將液體翻轉(zhuǎn)數(shù)次混勻，滴加時(shí)保持瓶身垂直。 3．洗滌時(shí)每孔均須加滿，防止孔內(nèi)有游離酶不能洗凈。 4．試劑置2-8℃存放，不能凍結(jié)，有效期10個(gè)月。 5．不同批號(hào)不要混用。 6．加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)孔的孵育時(shí)間一致。 7．嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。 檢測總過程（1小時(shí)35分鐘）
法國DIACLONE公司監(jiān)制并提供包被抗體、標(biāo)準(zhǔn)品、生物素二抗、酶標(biāo)和底物 腫瘤壞死因子α（TNF-α）檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 一、用途 本試劑盒用于體外定量檢測人血清、血漿、精液或細(xì)胞培養(yǎng)液等中的TNF-α的含量。 二、原理 本試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）。采用兩株識(shí)別不同表位的rHuTNF-α單克隆抗體，其中一株作為包被抗體，以識(shí)別和結(jié)合待檢標(biāo)本中的TNF-α，另一株作為酶標(biāo)抗體，與結(jié)合于包被抗體的TNF-α的另一表位結(jié)合，并催化底物顯色，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待檢標(biāo)本中TNF-α的含量。 三、試劑盒提供 1. TNF-α預(yù)包被板 96T 2. 酶標(biāo)抗體 １支 3. 標(biāo)準(zhǔn)品 6支（2.5ng/ml，1.25 ng/ml，0.625 ng/ml，0.312 ng/ml，0.156 ng/ml，0.078 ng/ml各1支） 4. 樣本（精液）稀釋液 1支（僅使用精液樣本實(shí)驗(yàn)時(shí)提供） 5. 陰性對(duì)照 1支 6. 顯色劑Ａ，Ｂ液 各１支 7. 終止液 １支 8. 說明書 1份 9. 30X濃縮洗滌液 1瓶(20ml，加蒸餾水1：30稀釋使用) 10. 坐標(biāo)紙 1張 四、樣品收集、處理與保存 1、細(xì)胞培養(yǎng)上清液：1000xg離心10分鐘去除顆粒和聚合物。 2、血清：操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱源和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000xg離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 3、血漿：EDTA，檸檬酸鹽和肝素血漿可用于檢測。1000xg離心30分鐘去除顆粒。 4、精液：首先室溫放置1小時(shí)，然后取上清使用試劑盒中提供的樣本稀釋液處理樣本。 5、保存：如果樣本不直接使用，將其分為小部分（250~500 ul）－70℃下保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能不要使用溶血或高脂血。如果血清中有大量顆粒，檢測前先離心或過濾。 注意：不要在37℃或更高溫度加熱解凍。在室溫下解凍并確保樣本均勻地充分解凍。 五、操作步驟 1. 將試劑盒平衡至室溫后取出反應(yīng)板拆封后于板架上。 2. 加待檢標(biāo)本：加待檢樣本（如果是精液樣本實(shí)驗(yàn)，則需使用樣本稀釋液1：1稀釋，然后加樣100 ul /孔）、陰性對(duì)照及標(biāo)準(zhǔn)品，100 ul /孔，37℃，1h。（6個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品按濃度由高至低依次加入）。 3. 加酶標(biāo)抗體：洗板3次，加入酶標(biāo)抗體10０ul /孔，37℃，1h。 4. 顯色：洗板3次，加入顯色劑Ａ，Ｂ液各１滴，37℃顯色10min。 六、結(jié)果判斷 1．目測：在白色背景下觀察各孔顯色情況，蘭色者為陽性，無色者為陰性。 2．酶標(biāo)儀測定：每孔加終止液一滴，混勻后在450nm下測定各孔O.D值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品OD值為Y軸，相應(yīng)的TNF-α標(biāo)準(zhǔn)品濃度為X軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待檢標(biāo)本中TNF-α的含量。 七、注意事項(xiàng) 1．孔板須密封防潮，從冷藏環(huán)境中取出時(shí)，應(yīng)置室溫平衡至潮氣盡干后方可開啟使用，余者封存置2-8℃。 2．滴加試劑前應(yīng)將液體翻轉(zhuǎn)數(shù)次混勻，滴加時(shí)保持瓶身垂直。 3．洗滌時(shí)每孔均須加滿，防止孔內(nèi)有游離酶不能洗凈。 4．試劑置2-8℃存放，不能凍結(jié)，有效期10個(gè)月。 5．不同批號(hào)不要混用。 6．加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)孔的孵育時(shí)間一致。 7．嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。 白細(xì)胞介素4（IL-4）檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 一、用途 本試劑盒用于體外定量檢測人血清、血漿、精液或細(xì)胞培養(yǎng)液等中的IL-4的含量。 二、原理 本試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）。采用抗IL-4特異多克隆抗體包被微孔板，已知IL-4濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣本、對(duì)照樣本和未知樣本加入微孔內(nèi)進(jìn)行檢測。先將IL-4抗原和生物素標(biāo)記的抗IL-4特異單克隆抗體同時(shí)孵育。洗滌后，加入親和素過氧化物酶。再經(jīng)過孵育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入酶復(fù)合物的作用底物，產(chǎn)生顏色反應(yīng)。顏色的深淺和樣本中IL-4的濃度呈比例關(guān)系。 三、試劑盒提供 1. IL-4預(yù)包被板 96T 2. 標(biāo)準(zhǔn)品 2支 3. 標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液 1支 4. 生物素標(biāo)記抗IL-4抗體 1支 5. 生物素標(biāo)記抗體稀釋液 1支 6. 親和鏈霉素-HRP 2支 7. HRP稀釋液 1支 8. 樣本（精液）稀釋液 1支（僅使用精液樣本實(shí)驗(yàn)時(shí)提供） 9. TMB １支 10. 終止液 １支 11. 說明書 1份 12. 洗滌緩沖液 1瓶(10ml，加蒸餾水100倍稀釋使用) 四、樣品收集、處理與保存 1、細(xì)胞培養(yǎng)上清液：1000xg離心10分鐘去除顆粒和聚合物。 2、血清：操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱源和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000xg離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 3、血漿：EDTA，檸檬酸鹽和肝素血漿可用于檢測。1000xg離心30分鐘去除顆粒。 4、精液：首先室溫放置1小時(shí)，然后取上清使用試劑盒中提供的樣本稀釋液處理樣本。 5、保存：如果樣本不直接使用，將其分為小部分（250~500 ul）－70℃下保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能不要使用溶血或高脂血。如果血清中有大量顆粒，檢測前先離心或過濾。 注意：1、不要在37℃或更高溫度加熱解凍。在室溫下解凍并確保樣本均勻地充分解凍。 2、96T的試劑盒最多分兩次做完，48T的試劑盒一次做完。 五、試劑的準(zhǔn)備 1. 標(biāo)準(zhǔn)品：按標(biāo)簽說明進(jìn)行說明，稀釋后濃度為35pg/ml IL-4。標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋須在試驗(yàn)前準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品輕輕震蕩5分鐘。標(biāo)準(zhǔn)品稀釋方案：35 pg/ml，17.5pg/ml，8.75pg/ml，4.4pg/ml，2.1 pg/ml， 1 pg/ml。 2. 生物素標(biāo)記抗IL-4的稀釋：每次實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備。根據(jù)實(shí)驗(yàn)的孔數(shù)，以生物素標(biāo)記抗體稀釋液稀釋。稀釋量見下表。
3. 親和鏈霉素-HRP的稀釋：5 ul親和鏈霉素-HRP加入0.5ml HRP稀釋液，每次實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備，不要保存此稀釋后液體。根據(jù)反應(yīng)孔的數(shù)量進(jìn)一步稀釋，見下表。
4. 洗滌緩沖液（100倍）的稀釋：蒸餾水100倍稀釋。 六、操作步驟 1. 試劑盒平衡至室溫后取出反應(yīng)板拆封后于板架上。 2. 加待檢標(biāo)本：加待檢樣本（如果是精液樣本實(shí)驗(yàn)，則需使用樣本稀釋液1：1稀釋，然后加樣100 ul /孔）、標(biāo)準(zhǔn)品，100 ul /孔（6個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品按濃度由高至低依次加入）?？瞻讓?duì)照孔加100 ul標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液。蓋上板蓋，室溫（18~25℃）下孵育2小時(shí)。 3. 洗板：吸去孔中的液體，加入0.3ml洗滌液；等待1分鐘后吸去洗滌液。重復(fù)此過程3次。 4. 各孔加入50 ul稀釋的生物素標(biāo)記抗IL-4，蓋上板蓋，室溫（18~25℃）下孵育1小時(shí)。 5. 洗板：步驟同步驟3。 6. 每孔中加入100 ul稀釋的親和鏈霉素-HRP，蓋上板蓋，室溫（18~25℃）下孵育20分鐘。 7. 洗板：步驟同步驟3。 8. 顯色：每孔加入100 ul TMB底物液，室溫（18~25℃）下避光孵育10~20分鐘。 七、結(jié)果判斷 酶標(biāo)儀測定：每孔加終止液100 ul，混勻后在450nm下測定各孔O.D值（620nm波長作為參考波長）。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品OD值為Y軸，相應(yīng)的IL-4標(biāo)準(zhǔn)品濃度為X軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待檢標(biāo)本中IL-4的含量。 八、局限 35pg/ml以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到精確的結(jié)果。大于35pg/ml IL-4的樣本應(yīng)以標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液稀釋后重做。在結(jié)果分析時(shí)，結(jié)合考慮相應(yīng)的稀釋度。 九、試劑盒性能 1. 靈敏度：最小的IL-4檢測濃度小于0.5pg/ml。稀釋度的線性：將含有35pg/ml IL-4的人血清用標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液系列稀釋。樣本線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)為0.99。 2. 特異性：不與人其他細(xì)胞因子反應(yīng)。 3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均〈10%。 十、注意事項(xiàng) 1．孔板須密封防潮，從冷藏環(huán)境中取出時(shí)，應(yīng)置室溫平衡至潮氣盡干后方可開啟使用，余者封存置2-8℃。 2．滴加試劑前應(yīng)將液體翻轉(zhuǎn)數(shù)次混勻，滴加時(shí)保持瓶身垂直。 3．洗滌時(shí)每孔均須加滿，防止孔內(nèi)有游離酶不能洗凈。 4．試劑置2-8℃存放，不能凍結(jié)，有效期10個(gè)月。 5．不同批號(hào)不要混用。 6．加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)孔的孵育時(shí)間一致。 7．嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。 檢測總過程（3小時(shí)35分鐘）
法國DIACLONE公司監(jiān)制并提供包被抗體、標(biāo)準(zhǔn)品、生物素二抗、酶標(biāo)和底物 白細(xì)胞介素5（IL-5）檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 一、用途 本試劑盒用于體外定量檢測人血清、血漿、精液或細(xì)胞培養(yǎng)液等中的IL-5的含量。 二、原理 本試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）。采用抗IL-5特異多克隆抗體包被微孔板，已知IL-5濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣本、對(duì)照樣本和未知樣本加入微孔內(nèi)進(jìn)行檢測。先將IL-5抗原和生物素標(biāo)記的抗IL-5特異單克隆抗體同時(shí)孵育。洗滌后，加入親和素過氧化物酶。再經(jīng)過孵育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入酶復(fù)合物的作用底物，產(chǎn)生顏色反應(yīng)。顏色的深淺和樣本中IL-5的濃度呈比例關(guān)系。 三、試劑盒提供 1. IL-5預(yù)包被板 96T 2. 標(biāo)準(zhǔn)品 2支 3. 標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液 1支 4. 生物素標(biāo)記抗IL-4抗體 1支 5. 生物素標(biāo)記抗體稀釋液 1支 6. 親和鏈霉素-HRP 2支 7. HRP稀釋液 1支 8. 樣本（精液）稀釋液 1支（僅使用精液樣本實(shí)驗(yàn)時(shí)提供） 9. TMB １支 10. 終止液 １支 11. 說明書 1份 12. 洗滌緩沖液 1瓶(10ml，加蒸餾水100倍稀釋使用) 四、樣品收集、處理與保存 1、細(xì)胞培養(yǎng)上清液：1000xg離心10分鐘去除顆粒和聚合物。 2、血清：操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱源和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000xg離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 3、血漿：EDTA，檸檬酸鹽和肝素血漿可用于檢測。1000xg離心30分鐘去除顆粒。 4、精液：首先室溫放置1小時(shí)，然后取上清使用試劑盒中提供的樣本稀釋液處理樣本。 5、保存：如果樣本不直接使用，將其分為小部分（250~500 ul）－70℃下保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能不要使用溶血或高脂血。如果血清中有大量顆粒，檢測前先離心或過濾。 注意：1、不要在37℃或更高溫度加熱解凍。在室溫下解凍并確保樣本均勻地充分解凍。 2、96T的試劑盒最多分兩次做完，48T的試劑盒一次做完。 五、試劑的準(zhǔn)備 1. 標(biāo)準(zhǔn)品：按標(biāo)簽說明進(jìn)行說明，稀釋后濃度為250pg/ml IL-5。標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋須在試驗(yàn)前準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品輕輕震蕩5分鐘。標(biāo)準(zhǔn)品稀釋方案：250 pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.25pg/ml，15.6 pg/m，7.8 pg/ml l。 2. 生物素標(biāo)記抗IL-5的稀釋：每次實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備。根據(jù)實(shí)驗(yàn)的孔數(shù)，以生物素標(biāo)記抗體稀釋液稀釋。稀釋量見下表。
3. 親和鏈霉素-HRP的稀釋：5 ul親和鏈霉素-HRP加入0.5ml HRP稀釋液，每次實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備，不要保存此稀釋后液體。根據(jù)反應(yīng)孔的數(shù)量進(jìn)一步稀釋，見下表。
4. 洗滌緩沖液（100倍）的稀釋：蒸餾水100倍稀釋。 六、操作步驟 1. 試劑盒平衡至室溫后取出反應(yīng)板拆封后于板架上。 2. 加待檢標(biāo)本：加待檢樣本（如果是精液樣本實(shí)驗(yàn)，則需使用樣本稀釋液1：1稀釋，然后加樣100 ul /孔）、標(biāo)準(zhǔn)品，100 ul /孔（6個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品按濃度由高至低依次加入）?？瞻讓?duì)照孔加100 ul標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液。蓋上板蓋，室溫（18~25℃）下孵育2小時(shí)。 3. 洗板：吸去孔中的液體，加入0.3ml洗滌液；等待1分鐘后吸去洗滌液。重復(fù)此過程3次。 4. 各孔加入50 ul稀釋的生物素標(biāo)記抗IL-5，蓋上板蓋，室溫（18~25℃）下孵育1小時(shí)。 5. 洗板：步驟同步驟3。 6. 每孔中加入100 ul稀釋的親和鏈霉素-HRP，蓋上板蓋，室溫（18~25℃）下孵育20分鐘。 7. 洗板：步驟同步驟3。 8. 顯色：每孔加入100 ul TMB底物液，室溫（18~25℃）下避光孵育10~20分鐘。 七、結(jié)果判斷 酶標(biāo)儀測定：每孔加終止液100 ul，混勻后在450nm下測定各孔O.D值（620nm波長作為參考波長）。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品OD值為Y軸，相應(yīng)的IL-5標(biāo)準(zhǔn)品濃度為X軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待檢標(biāo)本中IL-5的含量。 八、局限 250pg/ml以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到精確的結(jié)果。大于250pg/ml IL-5的樣本應(yīng)以標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液稀釋后重做。在結(jié)果分析時(shí)，結(jié)合考慮相應(yīng)的稀釋度。 九、試劑盒性能 1. 靈敏度：最小的IL-5檢測濃度小于5pg/ml。稀釋度的線性：將含有250pg/ml IL-5的人血清用標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液系列稀釋。樣本線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)為0.99。 2. 特異性：不與人其他細(xì)胞因子反應(yīng)。 3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均〈10%。 十、注意事項(xiàng) 1．孔板須密封防潮，從冷藏環(huán)境中取出時(shí)，應(yīng)置室溫平衡至潮氣盡干后方可開啟使用，余者封存置2-8℃。 2．滴加試劑前應(yīng)將液體翻轉(zhuǎn)數(shù)次混勻，滴加時(shí)保持瓶身垂直。 3．洗滌時(shí)每孔均須加滿，防止孔內(nèi)有游離酶不能洗凈。 4．試劑置2-8℃存放，不能凍結(jié)，有效期10個(gè)月。 5．不同批號(hào)不要混用。 6．加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)孔的孵育時(shí)間一致。 7．嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。 檢測總過程（3小時(shí)35分鐘）
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