作為報告基因,熒光蛋白(如綠色熒光蛋白(GFP)及其變體紅色熒光蛋白(RFP)和黃色熒光蛋白(YFP)或者生物熒光素酶(如螢火蟲熒光素酶(Firefly luciferase,F(xiàn)luc)海參熒光素酶(Renilla luciferase,Rluc))已成為研究基因調控、抗*藥*活性考察、基因突變分析、生物成像、DNA雜交分析及實時監(jiān)測腫瘤發(fā)生*展情況等生物過程的潛在有效分析工具。
但GFP等熒光蛋白的靈敏性相比于熒光素酶要低很多,而且GFP在細胞內容易累積,使其不適合實時監(jiān)測?,F(xiàn)有的生物熒光素酶中,F(xiàn)luc發(fā)光時需要輔助因子ATP和Mg2+,Rluc雖然不依賴于ATP和Mg2+等輔助因子,但光子產量較低,另外Fluc和Rluc均不能分泌表達,監(jiān)測酶活性時需要裂解細胞,操作繁瑣且不能實現(xiàn)對實驗現(xiàn)象的連續(xù)觀察。 近年,發(fā)現(xiàn)的一種來源于海洋橈腳類動物Gaussia princeps的Gaussia 分泌型熒光素酶是體內已知*小的可自然分泌的熒光素酶。因其可分泌、易于監(jiān)測、靈敏度過、半衰期短、可進行活細胞或生物體實時監(jiān)測等特性,在研究蛋白質-蛋白質相互作用、蛋白定位、小干擾RNA(siRNA)沉默技術、腫瘤模型藥*治*評價、監(jiān)測啟動子活性、實時監(jiān)測腫瘤發(fā)生*展情況和高通量藥*篩選等中得到廣泛應用。通過報告基因載體,Gaussia可用于哺乳動物細胞表達。表達后的Gaussia為單條肽鏈的單體酶,其分子較?。?85aa),且具有分泌性信號肽,因此可通過內質網分泌到細胞外。該熒光素梅催化底物腔腸素的氧化反應并且發(fā)光(480nm),該反應無需ATP參與。
分泌型雙熒光素酶檢測試劑盒,貨號:LF031 Secrete-Pair? Dual Luminescence Assay Kit用于檢測雙報告系統(tǒng)中Gaussia Luciferase (GLuc)和Secreted Alkaline Phosphatase (SEAP)的活性。GLuc和SEAP都是分泌型蛋白,無需裂解細胞就能從培養(yǎng)基中獲得實驗樣本。 分泌型單熒光素酶檢測試劑盒,貨號:LF061 試劑盒提供兩種用于Gluc分析的緩沖液。Buffer GL-S含有穩(wěn)定劑,彌補了Gluc信號快速衰退的缺點,可用于穩(wěn)定活性分析。Buffer GL-H適用于檢測低表達量的Gluc活性,可以提供更高的靈敏度。 熒光素酶報告基因載體,貨號:ZX101
與其他熒光素酶相比,使用Gaussia 作為報告基因有更多的優(yōu)勢: 1. 分泌型熒光素酶,可直接取上清檢測,無須裂解細胞; 2. 發(fā)光強度高,是其它熒光素酶的1千倍; 3. 反應無須ATP,不受ATP影響; 4. 穩(wěn)定性高,對溫度、PH值等耐受性強。
分泌型堿性磷酸酶(secreted alkaline phos-phatase,SEAP)是人胎盤堿性磷酸酶的突變體,*大特點是能由表達細胞分泌到細胞外,檢測時可在不破壞細胞的情況下,任意時間點取細胞培養(yǎng)上清液進行重復、動態(tài)的檢測,常作為熒光素酶檢測過程中信號標準化的內參。 GeneCopoeia 提供預制和定制的 GLuc-ON? 啟動子克隆,包括單報告基因載體系統(tǒng)和雙報告基因載體系統(tǒng)。單報告基因載體系統(tǒng)以 Gluc 作為啟動子的報告基因;雙報告基因載體系統(tǒng)以 Gluc 作為啟動子報告基因,以SEAP作為信號標準化的內參,可在活細胞中對超過 20,000 種人和 18,000 種小鼠啟動子進行實時活性分析。
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