來源：石頭道科普

在之前介紹PSA、HIV，HBV和HCV的過程中，總能看到各種公司利用聯(lián)合檢測提高疾病的診斷性能，如PHI，4KScore，4代試紙條，HBV&HIV聯(lián)合檢測等。本推送主要介紹目前常用的IVD聯(lián)合檢測技術(shù)平臺及其明星產(chǎn)品。

談到免疫診斷，大部分視角都關(guān)注化學(xué)發(fā)光、POCT等熱門領(lǐng)域。這種技術(shù)平臺的發(fā)展往往更傾向于解決提高免疫檢測的靈敏度、特異性、檢測區(qū)間、檢測速度、檢測通量等。但如果從疾病的角度或者檢測項(xiàng)目的角度看，人們更愿意提高免疫診斷對疾病的診斷性能，如減少假陽性和假陰性，縮短窗口期等。聯(lián)合檢測是目前最常用也是非常容易想到的解決思路之一。

在之前介紹PSA、HIV，HBV和HCV的過程中，總能看到各種公司利用聯(lián)合檢測提高疾病的診斷性能，如PHI，4KScore，4代試紙條，HBV&HIV聯(lián)合檢測等。這種利用多種標(biāo)志物以提高檢測性能的例子幾乎覆蓋每一種腫瘤檢測、傳染病篩查、感染確認(rèn)等。聯(lián)合檢測有很多特殊的應(yīng)用場景，甚至是無法回避的場景，如自身免疫疾病檢測、過敏原檢測等。

試紙條技術(shù)，即免疫層析法，其原理是將特異的抗體先固定于硝酸纖維素膜的某一區(qū)帶，當(dāng)該干燥的硝酸纖維素一端浸入樣品（尿液或血清）后，由于毛細(xì)管作用，樣品將沿著該膜向前移動，當(dāng)移動至固定有抗體的區(qū)域時，樣品中相應(yīng)的抗原即與該抗體發(fā)生特異性結(jié)合，若用免疫膠體金或免疫酶染色可使該區(qū)域顯示一定的顏色，從而實(shí)現(xiàn)特異性的免疫診斷。目前試紙條的標(biāo)記物形式多樣，有膠體金、乳膠顆粒、量子點(diǎn)、熒光物質(zhì)、上轉(zhuǎn)換顆粒和酶等。

試紙條是POCT最簡單，也是應(yīng)用最廣的技術(shù)平臺，通過加入多種檢測線可以實(shí)現(xiàn)聯(lián)合檢測的目的。最廣為人熟知的就是雅培HIV第四代試紙條，通過同時檢測HIV的抗體抗原實(shí)現(xiàn)HIV的快速檢測，窗口期可縮短為15-20天。

國內(nèi)POCT企業(yè)龍頭廣州萬孚有人類免疫缺陷病毒抗體、丙型肝炎病毒抗體、乙型肝炎病毒表面抗原、梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測試劑盒，其檢測原理就是膠體金法。其主打的應(yīng)用場景是手術(shù)前對患者進(jìn)行乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒的相關(guān)病原學(xué)檢查快速檢出“窗口期“患者，為手術(shù)方案制定提供檢驗(yàn)依據(jù)，有效避免醫(yī)源性感染，保護(hù)住院病人及醫(yī)護(hù)人員的安全。

免疫印跡（Western Blot，WB）采用聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）對樣品中的蛋白質(zhì)按照分子量進(jìn)行分離，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜，NC）上。固相載體可以吸附蛋白質(zhì)，并保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。轉(zhuǎn)移后的NC膜就稱為一個印跡（blot），用蛋白溶液（如BSA或脫脂奶粉溶液）封閉處理，封閉NC膜上的非特異結(jié)合位點(diǎn)。用目標(biāo)蛋白的抗體（一抗）孵育NC膜，只有待研究的蛋白質(zhì)才能與一抗特異結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，這樣清洗除去未結(jié)合的一抗后，只有在目標(biāo)蛋白上結(jié)合一抗。用一抗處理過的NC膜再用標(biāo)記的二抗孵育，帶有標(biāo)記的二抗與一抗結(jié)合形成抗體復(fù)合物可以指示一抗的位置，即是待研究的蛋白質(zhì)的位置，并根據(jù)顯色或發(fā)光的強(qiáng)度進(jìn)行定量。

國外在這個技術(shù)上比較出名的有GE的免疫印跡，自從1990年的第一代應(yīng)用于免疫印跡技術(shù)的增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光（ECL?）檢測試劑—即Amersham? ECL試劑面世以來，  GE Healthcare的產(chǎn)品手冊經(jīng)歷了不斷的改進(jìn)和優(yōu)化，包括了免疫印跡技術(shù)的相關(guān)需求，涵蓋了從電泳和電轉(zhuǎn)移儀器到高靈敏度的檢測系統(tǒng)和軟件。

另一項(xiàng)較為出名的是歐蒙的歐蒙印跡法?？赡芎芏嗳藢W蒙不是特別熟悉，歐蒙是全球非常著名的免疫診斷企業(yè)，其拳頭產(chǎn)品是自身免疫疾病相關(guān)的檢測，該系列產(chǎn)品連羅氏等巨頭都無法與其競爭。我個人非常喜歡這樣的企業(yè)，專注某個領(lǐng)域做到極致，是可以在巨頭林立的體外診斷市場生存下去并成為一方霸主的。

蛋白芯片屬于微陣列芯片的一種。蛋白芯片技術(shù)的基本原理是將各種蛋白質(zhì)有序地固定于滴定板、濾膜和載玻片等各種載體上成為檢測用的芯片。然后，用標(biāo)記了特定熒光抗菌素體的蛋白質(zhì)或其他成分與芯片作用，經(jīng)漂洗將未能與芯片上的蛋白質(zhì)互補(bǔ)結(jié)合的成分洗去，再利用熒光掃描儀或激光共聚焦掃描技術(shù)，測定芯片上各點(diǎn)的熒光強(qiáng)度，通過熒光強(qiáng)度分析蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間相互作用的關(guān)系，由此達(dá)到測定各種蛋白質(zhì)功能的目的。

國內(nèi)研究該技術(shù)比較出名的有上海裕隆生物科技有限公司、上海銘源數(shù)康生物芯片有限公司和湖州數(shù)康生物科技有限公司。裕隆生物具有強(qiáng)大的多種生物芯片(蛋白芯片、基因芯片、液相芯片、抗體芯片、組織芯片、磁芯片等)開發(fā)能力，自主創(chuàng)建了生物芯片載體處理技術(shù)、點(diǎn)樣技術(shù)、標(biāo)記技術(shù)、洗滌技術(shù)、檢測技術(shù)等，并開發(fā)了系列化產(chǎn)品。下圖是裕隆生物的產(chǎn)品部分截圖。

流式熒光技術(shù)又稱液態(tài)芯片技術(shù)(Luminex xMAP技術(shù))，其整合了熒光編碼微球、激光分析、應(yīng)用流體學(xué)及高速數(shù)字信號處理等多項(xiàng)最新科技，是美國Luminex公司于上世紀(jì)末開發(fā)出的新一代高通量發(fā)光檢測技術(shù)。目前該技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于免疫分析、核酸研究、酶學(xué)分析、受體和配體識別等領(lǐng)域，并得到各權(quán)威機(jī)構(gòu)和醫(yī)學(xué)界的高度認(rèn)可。

從免疫診斷看其技術(shù)原理，該技術(shù)最關(guān)鍵的是以Luminex xMAP熒光編碼微球?yàn)楹诵?/strong>，結(jié)合免疫學(xué)原理進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)，通過標(biāo)記其它熒光分子如藻紅蛋白等，運(yùn)用激光進(jìn)行熒光信號分析、實(shí)現(xiàn)多指標(biāo)并行檢測。因此其技術(shù)本身就具有高通量、并行檢測的特點(diǎn)。

我國也已有不少廠家將先進(jìn)的流式熒光技術(shù)平臺用于臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域高端的體外診斷試劑開發(fā)和生產(chǎn)，如國內(nèi)的透景生命（股票代碼：300642）、益善生物及協(xié)和洛克等。透景生命也開發(fā)出了多種聯(lián)合檢測試劑盒。