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專利名稱：一種檢測(cè)西地那非及其衍生物的方法 技術(shù)領(lǐng)域： 本發(fā)明涉及一種檢測(cè)枸櫞酸西地那非及其衍生物的方法。 背景技術(shù)： 西地那非由美國(guó)輝瑞制藥公司研發(fā)，最早是作為一個(gè)用于治療心血管疾病的5-磷酸二酯酶抑制劑而進(jìn)入臨床研究的。1991年研究人員發(fā)現(xiàn)西地那非對(duì)病者的性生活有改善，1998年3月27日獲得美國(guó)聯(lián)邦食品和藥品管理局的上市許可，用于治療男性勃起功能障礙(ED)。其結(jié)構(gòu)式如式I所示，分子式為C22H30N6O4S。 西地那非作為處方藥上市，但是某些食品、中藥制劑、以及保健食品生產(chǎn)商均試圖在其產(chǎn)品中加入西地那非成分以期令使用者獲得更加明顯的效果。生產(chǎn)及經(jīng)營(yíng)者未經(jīng)任何藥品審批程序，不在處方中標(biāo)明違法摻雜西地那非的情況早在2001年就引起國(guó)家藥檢、藥監(jiān)部門的重視，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局從2001年起開展了在全國(guó)范圍對(duì)在中藥中擅自添加枸櫞酸西地那非等其他物質(zhì)的違法行為專項(xiàng)打擊活動(dòng)，切實(shí)保證人民群眾用藥安全有效，依法嚴(yán)厲打擊在中藥中擅自添加枸櫞酸西地那非等其他物質(zhì)違法行為，并發(fā)布了TLC方法和HPLC方法用于檢查。 目前，食品、中藥制劑及保健食品中擅自添加西地那非的情況依然非常嚴(yán)重，并且違法者為規(guī)避檢查，不斷制造出西地那非的衍生物，藥檢部門由于難以取得上述衍生物純品作為對(duì)照品，因此對(duì)這些推陳出新的衍生物采用TLC或HPLC方法一時(shí)束手無策。對(duì)于藥店和基層藥檢所來說，由于缺乏先進(jìn)的檢驗(yàn)設(shè)備，甄別食品、中藥制劑和保健品中是否含有違禁藥物很困難，因此建立簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、快速的鑒別方法具有特別的意義。 發(fā)明內(nèi)容 本發(fā)明的目的是提供一種快速、方便的檢測(cè)西地那非及其衍生物的方法。 本發(fā)明所提供的檢測(cè)西地那非及其衍生物的方法，包括如下步驟1)顯色反應(yīng)將檢測(cè)樣品分別與碘化鉍鉀試液、硅鎢酸試液和磷鉬酸試液進(jìn)行顯色反應(yīng)，觀察結(jié)果；2)結(jié)果判斷當(dāng)上述三個(gè)顯色反應(yīng)均出現(xiàn)沉淀物時(shí)，說明檢測(cè)樣品中含有西地那非或西地那非衍生物；當(dāng)上述三個(gè)顯色反應(yīng)均沒有出現(xiàn)沉淀物或者只有一個(gè)或兩個(gè)顯色反應(yīng)出現(xiàn)沉淀物時(shí)，說明檢測(cè)樣品中不含有西地那非及西地那非衍生物。 其中，碘化鉍鉀試液配制方法為取次硝酸鉍0.85g，加冰醋酸10ml與水40ml溶解后，加40％碘化鉀溶液20ml，搖勻，即得；硅鎢酸試液的濃度為90～100g/L；磷鉬酸試液濃度為90～100g/L。 對(duì)于固體檢測(cè)樣品，在顯色反應(yīng)前還按如下過程制備供試品在研細(xì)或剪碎的樣品中加入甲醇，研磨使溶解，過濾或離心，濾液或上清液即為供試品。對(duì)于液體檢測(cè)樣品，可以直接進(jìn)行檢測(cè)。 本發(fā)明方法采用三種不同的反應(yīng)試劑分別與西地那非進(jìn)行顯色反應(yīng)，產(chǎn)生不同顏色的沉淀，協(xié)同判斷結(jié)果，更準(zhǔn)確可靠，方法的先進(jìn)性有如下幾點(diǎn)(1)快速、簡(jiǎn)便通常情況下，如果購(gòu)買現(xiàn)成的試劑，15分鐘之內(nèi)即可知道結(jié)果；相比于TLC(至少2小時(shí))、液相色譜、液質(zhì)聯(lián)用方法(至少5小時(shí))簡(jiǎn)便快捷得多，并且無需對(duì)照品。 (2)專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確率高根據(jù)方法驗(yàn)證結(jié)果，片劑、膠囊、蜜丸、酒劑等劑型的常用輔料對(duì)西地那非的檢出均無干擾。 (3)控制范圍廣該方法不僅可以控制目前批準(zhǔn)上市、藥檢和藥監(jiān)部門已了解的處方藥枸櫞酸西地那非、鹽酸伐地那非，還能檢查出其他西地那非衍生物，例如紅地那非等等，最大限度地杜絕假陰性結(jié)果。 (4)適用范圍廣該方法可以用于液體、固體，無論是食品、中藥制劑、保健品均可使用該方法。 (5)顯色反應(yīng)試劑配制簡(jiǎn)單，可長(zhǎng)期儲(chǔ)存。 具體實(shí)施例方式 實(shí)施例1、檢測(cè)方法本發(fā)明方法具體操作如下1、取樣量對(duì)于不同種類的待測(cè)樣品，推薦取樣量見下表1。 表1推薦取樣量表 2、供試品制備固體供試品制備在研細(xì)或剪碎的樣品中加入6～12ml甲醇，研磨使溶解，過濾或離心，濾液或上清液分為三份，分別置三支試管中；液體供試品制備直接量取樣品，分別置三支試管中；3、顯色反應(yīng)在上述試管中分別加入①碘化鉍鉀試液；②硅鎢酸試液；③10％磷鉬酸試液3～5滴；4、陽(yáng)性結(jié)果判斷西地那非與上述三種反應(yīng)試劑的反應(yīng)現(xiàn)象如表2所示。 表2、反應(yīng)試劑組成及與西地那非反應(yīng)現(xiàn)象 由表1可見，如果待測(cè)樣品中含有西地那非或西地那非衍生物，則上述三支試管應(yīng)分別出現(xiàn)①橙色沉淀、②白色沉淀、③黃色沉淀。如果沒有出現(xiàn)沉淀，或者僅其中一支試管出現(xiàn)沉淀，不能作為陽(yáng)性結(jié)果判斷；由于反應(yīng)生成的沉淀顏色比較明顯，通常即使樣品有顏色也不影響沉淀顏色判斷；如果樣品顏色影響了沉淀顏色的辨別，只要三支試管均出現(xiàn)沉淀，結(jié)果仍可判斷為陽(yáng)性。 在本發(fā)明反應(yīng)中，反應(yīng)試劑的濃度沒有特殊要求，一般地，碘化鉍鉀試液配制方法為取次硝酸鉍0.85g，加冰醋酸10ml與水40ml溶解后，加40％碘化鉀溶液20ml，搖勻，即得碘化鉍鉀試液。硅鎢酸試液的濃度為90～100g/L；磷鉬酸試液濃度為90～100g/L。 5、注意事項(xiàng)碘化鉍鉀試液在堿性溶液中可形成橙色沉淀，因此供試品溶液如顯堿性，需用稀鹽酸調(diào)節(jié)至弱酸性，以避免假陽(yáng)性反應(yīng)。 實(shí)施例2、本發(fā)明方法檢測(cè)西地那非的準(zhǔn)確性試驗(yàn)對(duì)40批樣品采用本發(fā)明方法進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)根據(jù)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品檢驗(yàn)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件(2006009，2006年3月14日發(fā)布)，采用HPLC-MS-MS方法檢查他達(dá)拉非、西地那非、伐地那非、洪地那非和還陽(yáng)堿，結(jié)果見表3。 表3多批樣品試驗(yàn)結(jié)果 *“不含”表示不含他達(dá)拉非、西地那非、伐地那非、洪地那非和還陽(yáng)堿。 結(jié)論根據(jù)上述試驗(yàn)與二級(jí)質(zhì)譜驗(yàn)證結(jié)果，本發(fā)明檢測(cè)方法無一例假陽(yáng)性報(bào)告，同時(shí)也未漏檢任何含西地那非及其衍生物的樣品，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。 取上述西地那非呈陰性反應(yīng)的21批樣品，摻入枸櫞酸西地那非對(duì)照品10mg，研磨，按方法所述進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)均呈陽(yáng)性反應(yīng)，結(jié)果表明本發(fā)明方法具有良好的準(zhǔn)確性，可排除樣品中各種輔料的干擾，專屬性強(qiáng)。 實(shí)施例3、西地那非衍生物的檢測(cè)本發(fā)明方法不僅可以檢測(cè)西地那非，還可以檢測(cè)西地那非衍生物，見式II、式III、式IV、式V和式VI。檢測(cè)方法及陽(yáng)性結(jié)果判斷與檢測(cè)西地那非相同。 取鹽酸伐地那非對(duì)照品(式V)、紅地那非(式IV)及還陽(yáng)堿(式VI)原料，采用本發(fā)明方法進(jìn)行檢測(cè)，均呈陽(yáng)性反應(yīng)。 實(shí)施例4、本發(fā)明檢測(cè)方法靈敏度對(duì)照品最小檢出量枸櫞酸西地那非、鹽酸伐地那非對(duì)照品中國(guó)藥品生物制品檢定所，純度100％；洪地那非和還陽(yáng)堿對(duì)照品市場(chǎng)購(gòu)買原料，經(jīng)核磁結(jié)構(gòu)確證。 取枸櫞酸西地那非、鹽酸伐地那非、洪地那非和還陽(yáng)堿對(duì)照品各10mg，分別精密稱定，分別加甲醇溶解并稀釋制成每1ml中含0.5mg、1mg、2mg的溶液各三份，搖勻，分別置試管中，分別加上述三種反應(yīng)試劑，觀察顯色反應(yīng)結(jié)果。 反應(yīng)試劑與西地那非及其衍生物反應(yīng)的靈敏度結(jié)果見表4。 表4、三種反應(yīng)試劑與西地那非及其衍生物的反應(yīng)靈敏度 因此，對(duì)于西地那非及其衍生物，本發(fā)明方法的檢測(cè)靈敏度可達(dá)到2mg。 權(quán)利要求 1.一種檢測(cè)西地那非及其衍生物的方法，包括如下步驟1)顯色反應(yīng)將檢測(cè)樣品分別與碘化鉍鉀試液、硅鎢酸試液和磷鉬酸試液進(jìn)行顯色反應(yīng)，觀察結(jié)果；2)結(jié)果判斷當(dāng)上述三個(gè)顯色反應(yīng)均出現(xiàn)沉淀物時(shí)，說明檢測(cè)樣品中含有西地那非或西地那非衍生物；當(dāng)上述三個(gè)顯色反應(yīng)均沒有出現(xiàn)沉淀物或者只有一個(gè)或兩個(gè)顯色反應(yīng)出現(xiàn)沉淀物時(shí)，說明檢測(cè)樣品中不含有西地那非及西地那非衍生物。 2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于碘化鉍鉀試液配制方法為取次硝酸鉍0.85g，加冰醋酸10ml與水40ml溶解后，加40％碘化鉀溶液20ml，搖勻，即得碘化鉍鉀試液。 3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于硅鎢酸試液的濃度為90～100g/L。 4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于磷鉬酸試液濃度為90～100g/L。 5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于對(duì)于固體檢測(cè)樣品，在顯色反應(yīng)前還按如下過程制備供試品在研細(xì)或剪碎的樣品中加入甲醇，研磨使溶解，過濾或離心，濾液或上清液即為供試品。 全文摘要 本發(fā)明公開了檢測(cè)西地那非及其衍生物的方法，包括如下步驟1)顯色反應(yīng) 將檢測(cè)樣品分別與碘化鉍鉀試液、硅鎢酸試液和磷鉬酸試液進(jìn)行顯色反應(yīng)，觀察結(jié)果；2)結(jié)果判斷 當(dāng)上述三個(gè)顯色反應(yīng)均出現(xiàn)沉淀物時(shí)，說明檢測(cè)樣品中含有西地那非或西地那非衍生物；當(dāng)上述三個(gè)顯色反應(yīng)均沒有出現(xiàn)沉淀物或者只有一個(gè)或兩個(gè)顯色反應(yīng)出現(xiàn)沉淀物時(shí)，說明檢測(cè)樣品中不含有西地那非及西地那非衍生物。本發(fā)明方法具有快速、簡(jiǎn)便，專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確率高，適用、檢測(cè)范圍廣等優(yōu)點(diǎn)。 文檔編號(hào)G01N33/15GK101021479SQ20071006456 公開日2007年8月22日 申請(qǐng)日期2007年3月20日 優(yōu)先權(quán)日2007年3月20日 發(fā)明者張喆, 高青, 車寶泉, 周立春, 代紅, 王志斌, 趙明, 方潁, 郭洪祝 申請(qǐng)人:北京市藥品檢驗(yàn)所 |
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