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收藏!快來(lái)領(lǐng)取你的色譜手動(dòng)積分指南

 留在家里 2019-02-19

寫(xiě)在前面

色譜積分方法,最近幾年控制的比較嚴(yán)格,部分規(guī)定任何的積分方法修改都要經(jīng)過(guò)批準(zhǔn)。而手動(dòng)積分又是實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常面臨的問(wèn)題,所以,何時(shí)可以手動(dòng)積分?如何進(jìn)行手動(dòng)積分?這些一直以來(lái)都是色譜分析工作者最頭疼的問(wèn)題,今天小析姐就和你一起啃掉這塊“硬骨頭”。


定義


1

積分

指在信號(hào)中確定峰并計(jì)算其大小,積分包括以下操作及步驟:識(shí)別、校正、定量。


2

積分事件的參數(shù)控制

對(duì)于某個(gè)信號(hào)進(jìn)行積分時(shí),軟件將識(shí)別每個(gè)峰的開(kāi)始和結(jié)束時(shí)間,并用豎線標(biāo)記這些點(diǎn),尋找每個(gè)峰的峰頂點(diǎn),確定保留時(shí)間/遷移時(shí)間,建立基線,以及計(jì)算每個(gè)峰的峰面積、峰高和峰寬。這些過(guò)程積分事件的參數(shù)控制。


3

自動(dòng)積分

自動(dòng)積分功能為設(shè)置初始事件提供開(kāi)始點(diǎn)。自動(dòng)積分功能設(shè)置以下參數(shù):初始斜率靈敏度(閾值)、初始峰高、初始峰寬、初始最小峰面積


4

手動(dòng)積分

此類(lèi)型的積分允許對(duì)選定的峰或峰組進(jìn)行積分,在指定的手動(dòng)積分范圍內(nèi),將忽略此軟件的事件積分(初始最小峰面積除外)。如果手動(dòng)積分出來(lái)的一個(gè)或多個(gè)峰低于最小峰面積閾值,則此積分將被廢棄。手動(dòng)積分時(shí)間使用絕對(duì)時(shí)間值。它們不會(huì)為信號(hào)漂移作調(diào)整。


在報(bào)告中,手動(dòng)積分提供以下功能:

§ 劃基線:指定為一個(gè)峰或一組峰劃基線的位置;

§ 負(fù)峰:指定何時(shí)將基線以下的面積當(dāng)作負(fù)峰處理;

§ 切線撇去:計(jì)算從主峰切線撇去的峰面積;

§ 分裂峰:指定用垂線分裂峰的點(diǎn);

§刪除峰:從積分結(jié)果中刪除一個(gè)或多個(gè)峰。


積分參數(shù)


自動(dòng)積分主要是修改以下4個(gè)積分參數(shù)實(shí)現(xiàn)的,具體如下:


1

斜率靈敏度(Slope Sensitivity)

也稱(chēng)閾值,指設(shè)置信號(hào)斜率的值,該斜率用于識(shí)別積分過(guò)程中峰的起點(diǎn)和終點(diǎn)。如何信號(hào)斜率大于“斜率靈敏度”值,將建立峰起點(diǎn),如果信號(hào)斜率降到“斜率靈敏度”以下,將建立峰止點(diǎn)。


設(shè)置值越低,峰響應(yīng)越靈敏,當(dāng)然,不同品牌的儀器對(duì)設(shè)置值的響應(yīng)程度會(huì)有所區(qū)別。


2

峰寬值(Peak Width)

用于控制積分器的選擇性以區(qū)分峰與基線噪音。如果設(shè)置的初始峰寬太小,則可能將噪音當(dāng)作峰。如果寬峰與窄峰混在一起,可以選用運(yùn)行時(shí)間編程事件設(shè)定特定的峰寬。


3

最小峰面積值(Area Reject)

根據(jù)峰面積來(lái)設(shè)置小于目標(biāo)峰面積的峰將不被積分也不會(huì)報(bào)告;


4

最小峰高(Height Reject)

最小目標(biāo)峰的高度,任何小于最小峰高的峰將不被積分及報(bào)告。


何時(shí)進(jìn)行手動(dòng)積分


1.低分離度或低響應(yīng);


2.流動(dòng)相不穩(wěn)定,基線紊亂,保留時(shí)間變化?。?nbsp;


3.運(yùn)行過(guò)程中,出現(xiàn)異常峰; 


4.軟件積分的局限性,如由于軟件參數(shù)閾值的設(shè)置導(dǎo)致峰未積分,峰起點(diǎn)和終點(diǎn)間出現(xiàn)肩峰和異常的基線漂移,軟件錯(cuò)誤;


5.由于樣品母體的干擾導(dǎo)致的復(fù)雜色譜圖,裂峰、目標(biāo)雜質(zhì)的同時(shí)洗脫/肩峰、基線噪音、負(fù)峰、基線上升或下降、峰的嚴(yán)重拖尾、烴類(lèi)的存在導(dǎo)致自動(dòng)積分不正確。


積分原則


1

關(guān)于手動(dòng)積分

能進(jìn)行手動(dòng)積分嗎?答案是肯定的,可以進(jìn)行手動(dòng)積分,但手動(dòng)積分必須在受控的情況下進(jìn)行。一般情況下,應(yīng)采用自動(dòng)積分方式,不可以手動(dòng)積分。特殊情況下,若是目標(biāo)峰實(shí)在無(wú)法自動(dòng)積分的,即對(duì)于采取高級(jí)積分的方式還不能將峰有效的積分,經(jīng)申請(qǐng)與批準(zhǔn)后,可以進(jìn)行手動(dòng)積分。


此外必須嚴(yán)格控制手動(dòng)積分次數(shù),因?yàn)槿绻惶缀玫姆治龇椒?,峰與峰之間分離較好,根本是不需要手動(dòng)積分,如果需要手動(dòng)積分的圖譜,分析方法必定不好。


2

關(guān)于忽略限

單個(gè)雜質(zhì)及總雜質(zhì)的定量測(cè)定,選擇合適的閾值設(shè)置和合適的條件進(jìn)行積分是很重要的。這種情況下,峰值可忽略通常設(shè)為0.05%。因此,數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)的閾值設(shè)置至少相當(dāng)于這個(gè)限制的一半(0.025%)。對(duì)任何未與主峰完全分離的雜質(zhì)進(jìn)行積分,最好采用峰谷對(duì)峰谷外推法(切向撇去法)?!?/span>


3

關(guān)于積分方法是否需要固定

積分方法是否需要固定?個(gè)人認(rèn)為應(yīng)該分情況,分析方法驗(yàn)證期間時(shí)積分參數(shù)摸索期,通過(guò)整套分析方法驗(yàn)證過(guò)程來(lái)確定積分參數(shù),這期間沒(méi)有修改積分參數(shù)之說(shuō),因?yàn)楸旧砭蜎](méi)有積分方法。放行檢測(cè)的積分方法可以先根據(jù)驗(yàn)證情況進(jìn)行確定,之后所有檢測(cè)的積分方法應(yīng)該是固定,任何修改積分參數(shù)的行為應(yīng)該進(jìn)行申請(qǐng),批準(zhǔn)后方可修改。


穩(wěn)定性考察為了反映雜質(zhì)的趨勢(shì),積分方法可以與放行方法不同,但不同時(shí)間點(diǎn)的積分方法應(yīng)該相同,任何修改,同樣需要申請(qǐng)及批準(zhǔn)。


4

積分方法的審計(jì)追蹤

目前的色譜系統(tǒng),均有審計(jì)追蹤,當(dāng)我們對(duì)積分方法進(jìn)行修改時(shí),均會(huì)出現(xiàn)“comment”,要求輸入具體的修改內(nèi)容。


手動(dòng)積分的方法及演示


1.色譜軟件使用動(dòng)態(tài)尋峰算法和自動(dòng)尋峰算法。


2.通常建議先用軟件積分色譜來(lái)處理像峰寬、閾值、峰高及峰面積等需要積分的情形。


3.因?yàn)橐恍┕逃械幕蚍治鲎兓约盎€漂移的原因,自動(dòng)積分將會(huì)有偏差,從而進(jìn)行手動(dòng)積分。


圖 6.3.7-1表示標(biāo)準(zhǔn)品和某濃度下的樣品通過(guò)同樣的積分事件進(jìn)行積分,并一同呈現(xiàn)在同一色譜圖中。對(duì)小峰、接近峰、負(fù)峰、漂移峰以及峰谷進(jìn)行積分需要時(shí)間和技巧。不推薦手動(dòng)積分,且應(yīng)盡可能避免進(jìn)行手動(dòng)積分。


圖 6.3.7-2 是一個(gè)模型色譜圖,它同時(shí)展現(xiàn)了手動(dòng)積分峰和軟件積分峰。


打印出的色譜圖應(yīng)以可見(jiàn)比例形式呈現(xiàn)各個(gè)分析項(xiàng)需要的內(nèi)容,如對(duì)于含量和單個(gè)分析項(xiàng),峰頂應(yīng)可見(jiàn);對(duì)于純度分析,峰基應(yīng)可見(jiàn)。

圖 6.3.7-3以一個(gè)有著適當(dāng)比例和可見(jiàn)的色圖譜來(lái)說(shuō)明適當(dāng)?shù)姆e分。行業(yè)內(nèi)通常的做法是為多組分分析提供清晰可見(jiàn)的基線,而為單峰分析提供整個(gè)色譜峰。


圖 6.3.7-4a是一張以最大比例打印的色譜圖,其中峰值積分并不可見(jiàn)。Figure 6.3.7-4b是同樣的色譜圖以適當(dāng)?shù)谋壤蛴?,其中可以看到峰值修正和缺失峰的積分,揭示了手動(dòng)積分操作。



含量溶出度以及含量均一性包含了對(duì)單一分析物/峰按照已知標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行計(jì)算的分析項(xiàng)目。在這些類(lèi)型的分析項(xiàng)目中,都期望其具有準(zhǔn)確和精確的系統(tǒng)適應(yīng)性特征的高斯峰。正常的高斯峰應(yīng)該確切地從色譜峰起始位置開(kāi)始積分到截止為止結(jié)束積分。圖 6.3.7-5a-5f 展現(xiàn)了這些類(lèi)型測(cè)試代表性的峰積分。


圖 6.3.7-5a是單組分分析的未處理的信號(hào)峰。圖 6.3.7-5b表示的是對(duì)原始數(shù)據(jù)以適當(dāng)?shù)姆e分事件進(jìn)行積分并以可見(jiàn)的比例呈現(xiàn)。圖 6.3.7-5c 表示的是通過(guò)修整積分而產(chǎn)生了低面積的峰。圖 6.3.7-5d表示的是對(duì)原始數(shù)據(jù)用不適當(dāng)?shù)姆e分事件進(jìn)行積分會(huì)表達(dá)更多的面積。


在這些圖示中,所有的積分都是通過(guò)調(diào)整色譜軟件的積分事件來(lái)完成的。色譜軟件會(huì)標(biāo)示出哪些峰是手動(dòng)積分的。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該有適當(dāng)?shù)目刂拼胧┮詸z測(cè)應(yīng)用了錯(cuò)誤的積分事件而造成的數(shù)據(jù)損毀。


Figure 6.7.7-6a-6c 和Figure 6.7.7-7a-7c展示的是成分分析/色譜純度分析這種多組分分析(峰組)中的發(fā)生的積分錯(cuò)誤。這兩種情況下,報(bào)告的峰面積都會(huì)減少。


手動(dòng)積分注意事項(xiàng)


1.手動(dòng)積分不能試圖通過(guò)以下動(dòng)作來(lái)使數(shù)據(jù)符合標(biāo)準(zhǔn)要求:減少峰(減少峰面積)、增加峰(增加峰面積)、改變峰高;

 

2.同一次檢驗(yàn)的所有標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品、樣品等必須使用同一方法進(jìn)行手動(dòng)積分;

 

3.手動(dòng)積分結(jié)束后,應(yīng)打印自動(dòng)積分圖譜和手動(dòng)積分圖譜附于手動(dòng)積分申請(qǐng)表之后,提交QC經(jīng)理審核;

 

3.自動(dòng)積分的圖譜不得刪除或被覆蓋,應(yīng)與手動(dòng)積分圖譜保存于計(jì)算機(jī)中,打印的自動(dòng)積分圖譜和手動(dòng)積分圖譜應(yīng)標(biāo)識(shí)清楚簽名,隨同手動(dòng)積分申請(qǐng)表附于檢驗(yàn)原始記錄后面一起交質(zhì)量管理部經(jīng)理、QP審核無(wú)問(wèn)題后歸檔。

 


4.研發(fā)和生物實(shí)驗(yàn)室可能需要手動(dòng)積分。盡管對(duì)于QC實(shí)驗(yàn)室,手動(dòng)積分可能僅在特殊情況下是必需的或可接受的;但手動(dòng)積分還是不適合應(yīng)用于分析檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。手動(dòng)積分只有在得到主管書(shū)面批準(zhǔn)且結(jié)果正確記錄后,根據(jù)批準(zhǔn)程序才能進(jìn)行,而不應(yīng)該由分析師自行決定。

(內(nèi)容來(lái)源:網(wǎng)絡(luò) :由實(shí)驗(yàn)與分析小析姐整理編輯)

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