問題

可能原因

解決辦法

低信號(hào)（樣本和標(biāo)準(zhǔn)曲線）

1、舊涂層板或試劑

2、洗滌孔板過于劇烈

3、孔板內(nèi)液體蒸發(fā)干了

4、反應(yīng)不充分

5、波長不正確

1、準(zhǔn)備新的板和試劑（檢查pH值），適當(dāng)儲(chǔ)存

2、洗滌孔板時(shí)應(yīng)輕柔

3、采用密封膜封板

4、優(yōu)化反應(yīng)溫度和時(shí)間

5、檢查酶標(biāo)儀上的過濾器和軟件

信號(hào)低（僅樣本）

1、樣品中待測抗原或抗體低于檢測水平

2、樣本類型不匹配

1、減少樣品稀釋倍數(shù)或濃縮樣品

2、使用陽性對(duì)照確保匹配性

信號(hào)低/差（僅標(biāo)準(zhǔn)曲線）

1、標(biāo)準(zhǔn)品組合或存儲(chǔ)不恰當(dāng)

2、標(biāo)準(zhǔn)品添加錯(cuò)誤

3、稀釋計(jì)算不正確

1、重新配置標(biāo)準(zhǔn)品，儲(chǔ)存在-70oC

2、檢查移液是否錯(cuò)誤

3、檢查計(jì)算

陰性對(duì)照有陽性結(jié)果

1、樣品污染

2、洗滌不充分

3、檢測抗體與包被抗體交叉反應(yīng)（在夾心ELISA中）

1、小心使用新鮮試劑和移液器

2、增加洗滌次數(shù)

3、確?？贵w不會(huì)發(fā)生交叉反應(yīng)

高背景

1、空白孔污染

2、洗滌不充分

1、小心移液，使用多通道移液器

2、增加洗滌次數(shù)

高信號(hào)

1、樣品中含有高于測定范圍的抗原

2、洗滌不充分

3、樣品顏色過深

1、稀釋樣品

2、增加洗滌次數(shù)

3、減少孵育時(shí)間或降低孵育溫度

重復(fù)性不好

1、孔內(nèi)有氣泡

2、移液不一致

3、邊緣效應(yīng)（即與中心孔邊緣不同的信號(hào)）

4、樣品不均一

5、反應(yīng)時(shí)孔板疊放

1、確保在加樣后孔內(nèi)沒有氣泡

2、使用校準(zhǔn)的移液器并小心移液

3、確保所有的孔具有相同的溫度和濕度，使用板密封膜并搖動(dòng)

4、在移液前充分混合樣品

5、不要疊放孔板板

優(yōu)點(diǎn)

缺點(diǎn)

直接ELISA

1、快速、

2、避免了二抗交叉反應(yīng)

1、靈敏度低

2、每種ELISA需特異性抗體；耗時(shí)且昂貴

間接ELISA

1、高靈敏度

2、節(jié)約成本

3、靈活；可以使用許多一抗

二抗之間存在交叉反應(yīng)

夾心ELISA

1、極少需要純化樣品

2、靈敏度高且特異性強(qiáng)

1、必須使用“匹配”的一抗和二抗

2、耗時(shí)且昂貴

競爭ELISA

1、極少需要純化樣品

2、用于測量樣品中的大范圍抗原

3、用于小抗原

4、可變性低

特異性低，不能用于稀釋樣品