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個(gè)體化治療目前已被公認(rèn)是提高腫瘤患者生存期和生活質(zhì)量的最佳途徑。而制定個(gè)性化治療方案、提高療效，臨床醫(yī)生最需要精準(zhǔn)的分子病理診斷報(bào)告。傳統(tǒng)的以形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)的組織學(xué)觀察、免疫組化、透射電鏡、免疫電鏡等病理診斷技術(shù)所提供的信息已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)滿足不了精準(zhǔn)醫(yī)療的需要。 一、目前常用的分子病理檢測技術(shù)有： 原位雜交（ISH） 原位雜交技術(shù)的基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補(bǔ)的堿基序列，將有放射性或非放射性的外源核酸(即探針)與組織、細(xì)胞或染色體上待測DNA或RNA互補(bǔ)配對，結(jié)合成專一的核酸雜交分子，經(jīng)一定的檢測手段將待測核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來。 為顯示特定的核酸序列必須具備3個(gè)重要條件：組織、細(xì)胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補(bǔ)的核苷酸序列(即探針)、有與探針結(jié)合的標(biāo)記物(曾呈奎等2000)。 熒光原位雜交（FISH） FISH技術(shù)是一種重要的非放射性原位雜交技術(shù)。它的基本原理是：如果被檢測的染色體或DNA纖維切片上的靶DNA與所用的核酸探針是同源互補(bǔ)的，二者經(jīng)變性-退火-復(fù)性，即可形成靶DNA與核酸探針的雜交體。將核酸探針的某一種核苷酸標(biāo)記上報(bào)告分子如生物素、地高辛，可利用該報(bào)告分子與熒光素標(biāo)記的特異親和素之間的免疫化學(xué)反應(yīng)，經(jīng)熒光檢測體系在鏡下對待測DNA進(jìn)行定性、定量或相對定位分析。 實(shí)驗(yàn)流程：FISH樣本的制備→探針的制備→探針標(biāo)記→雜交→（染色體顯帶）→熒光顯微鏡檢測→結(jié)果分析。 基因突變檢測 基因突變檢測在分子靶向治療篩選適用人群中起決定性作用，如檢測肺腺癌組織EGFR、KRAS基因突變，結(jié)直腸癌KRAS、BRAF、PI3K基因突變，胃腸道間質(zhì)瘤（GIST）、c-KIT、PDGFRA基因突變，是選擇易瑞沙、愛必妥、格列衛(wèi)等分子靶向治療藥物的前提。 目前的檢測方法有DNA序列測定、實(shí)時(shí)PCR（real-time PCR）技術(shù)和焦磷酸測序、高分辨率溶解曲線、ARMS法等。檢測方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，實(shí)際工作中應(yīng)結(jié)合樣本及檢測方法的特點(diǎn)，選擇合適的檢測方法以提高準(zhǔn)確性。 染色體異位檢測 染色體異位是指2條非同源染色體同時(shí)發(fā)生斷裂，所形成的斷裂片段移至另一條染色體斷端，并連接形成新染色體，常見于淋巴造血系統(tǒng)腫瘤及骨和軟組織肉瘤中。 由于染色體異位具有特異性，為非隨機(jī)性，對腫瘤具有鑒別診斷意義。例如染色體異位t（X；18）（p11.2；q11.2）及其導(dǎo)致的SYT-SSX基因融合是滑膜肉瘤的分子遺傳學(xué)特征，檢測SYT-SSX融合基因及其產(chǎn)物有助于滑膜肉瘤的鑒別診斷。 流式細(xì)胞技術(shù) 流式細(xì)胞技術(shù)（flow cytometry,FCM）是利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行的一種單細(xì)胞定量分析和分選技術(shù)。流式細(xì)胞術(shù)是單克隆抗體及免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、激光和電子計(jì)算機(jī)科學(xué)等高度發(fā)展及綜合利用的高技術(shù)產(chǎn)物。 流式細(xì)胞技術(shù)的應(yīng)用： 1.其測定細(xì)胞內(nèi)DNA的變異系數(shù)最小，一般在2%以下； 2.能準(zhǔn)確地進(jìn)行DNA倍體分析； 3.借助于熒光染料進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和核酸的定量研究； 4.快速進(jìn)行細(xì)胞分選和細(xì)胞收集； 5.醫(yī)學(xué)應(yīng)用：免疫功能研究各種干細(xì)胞的檢測，癌癥病人的多藥耐藥性，細(xì)胞功能及代謝動力學(xué)研究，血小板分析（心血管疾病），流式細(xì)胞術(shù)與分子生物學(xué)研究； 6.應(yīng)用于外周血內(nèi)皮細(xì)胞測定、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞等尖端領(lǐng)域。 二、目前臨床應(yīng)用的分子病理檢測項(xiàng)目有： 1.腫瘤相關(guān)病毒感染檢測：一些腫瘤與特定的腫瘤相關(guān)病毒感染關(guān)系密切，如人類皰疹病毒(EB病毒)與鼻咽癌、NK/T細(xì)胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤，高危型人乳頭狀病毒(HPV)與宮頸癌等，這些病毒的相關(guān)分子成份可通過分子生物學(xué)方法檢測出來。 2.淋巴瘤基因重排及染色體易位：單克隆性淋巴細(xì)胞受體基因重排是淋巴系統(tǒng)腫瘤的典型特征，可通過PCR技術(shù)檢測出來。同時(shí)，一些淋巴瘤亞型存在特定的染色體易位，可通過FISH、PCR等方法進(jìn)行檢測用于輔助鑒別診斷。 3.軟組織肉瘤鑒別診斷：軟組織肉瘤存在特征性的染色體易位，可通過FISH、RT-PCR等方法檢測出來，用于鑒別診斷。 4.HER2、EGFR基因狀態(tài)及ALK易位等檢測：FISH檢測HER2、EGFR基因擴(kuò)增狀態(tài)及ALK易位，可以指導(dǎo)乳腺癌、胃癌、肺癌患者進(jìn)行靶向治療。 5.EGFR、KRAS、c-KIT等基因突變檢測：基因突變是指遺傳物質(zhì)發(fā)生的變異。研究表明，靶向藥物的療效與相關(guān)基因的突變情況有密切關(guān)系。針對臨床應(yīng)用的靶向治療，目前開展的基因突變檢測項(xiàng)目有非小細(xì)胞肺癌EGFR、KRAS基因突變檢測，結(jié)直腸癌KRAS、BRAF、PIK3CA基因突變檢測，胃腸道間質(zhì)瘤c-KIT和PDGFRA基因突變檢測等。
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