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如何做出令人滿意的 WB 實(shí)驗(yàn)?

 微笑如酒 2018-05-12

Western blot 是科研研究中最常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)之一,但在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,每一步都可能會(huì)影響最后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果今天學(xué)霸君給大家?guī)?lái)幾款在 WB 實(shí)驗(yàn)中會(huì)用到的科研好物,幫助各位實(shí)驗(yàn)汪都能做出清晰漂亮的 WB 條帶。


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1

 

萬(wàn)類生物全蛋白提取試劑盒


蛋白質(zhì)提取是 WB 實(shí)驗(yàn)的第一步,提取質(zhì)量直接影響最后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。在提取中應(yīng)集中提取目的蛋白,通過(guò)低溫操作和合適的蛋白酶防止蛋白發(fā)生降解、聚集、沉淀,盡量除去干擾分子。


丁香通優(yōu)選萬(wàn)類生物的明星款全蛋白提取試劑盒(Whole Cell Lysis Assay),可用于從哺乳動(dòng)物組織和細(xì)胞中提取全蛋白,用含有蛋白酶抑制劑的裂解緩沖液 Lysis Buffer 勻漿裂解組織或細(xì)胞,提取過(guò)程簡(jiǎn)便高效。獲得的全蛋白可用于 Western Blot、IP 等后續(xù)研究。


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2

 

wshtbio 電泳預(yù)制膠


電泳是 WB 實(shí)驗(yàn)中的重頭戲,稍有不慎就只能對(duì)著 「微笑線」和 「皺眉線」 嘆氣。電泳膠是影響電泳效果的重要因素之一,配制之后膠不凝是很多科研汪們最無(wú)奈的事情。


今天學(xué)霸君為大家?guī)?lái)一款高性能的 wshtbio 電泳預(yù)制膠,采用專利凝膠和緩沖液配方,分辨率高,條帶清晰,電泳效果極佳, 電泳時(shí)間短,在 150V 電壓下,電泳 40-50 分鐘即可完成,玻璃電泳板,蛋白吸附率低,電泳效果更好。



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3

 

Pall PVDF 轉(zhuǎn)印膜


轉(zhuǎn)膜是 WB 實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵環(huán)節(jié),稍有不慎之前的辛苦努力就會(huì)付諸東流了。轉(zhuǎn)膜不充分或過(guò)轉(zhuǎn)都容易導(dǎo)致蛋白結(jié)構(gòu)的改變。


這款美國(guó)原裝進(jìn)口的 Pall PVDF 轉(zhuǎn)印膜,蛋白結(jié)合能力高,通常比尼龍或硝酸纖維素膜的吸附能力提高 50%,且敏感度很高,可用于小肽段,拉伸度高,在操作過(guò)程中不會(huì)破開(kāi)、裂開(kāi)或卷曲,在蛋白質(zhì)測(cè)序操作中,可以很方便的卸下目標(biāo)條帶。適用于 Western 轉(zhuǎn)印,是低本底和極低穿透率的敏感蛋白質(zhì)檢測(cè)的理想選擇。



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4

 

Meilunbio? 飛克特超敏 ECL 發(fā)光液


辛辛苦苦做了半天的 WB,該到了讓干凈漂亮的 WB 帶現(xiàn)形的顯影環(huán)節(jié)了。學(xué)霸君推薦這款 Meilunbio 的飛克特超敏 ECL 發(fā)光液,對(duì)抗原的最低檢測(cè)限可達(dá)到中飛克級(jí)。


發(fā)光信號(hào)持久,信噪比高,條帶清晰,結(jié)果可以通過(guò) X 光膠片曝光或者其他適當(dāng)熒光成像設(shè)備進(jìn)行檢測(cè)。更重要的是抗猝滅能能力強(qiáng),可重復(fù)曝光。


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