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慢病毒載體構建原理

 實驗專家 2018-01-22

慢病毒載體的包裝系統(tǒng)一般由兩部分組成,即包裝成分和載體成分。包裝成分由HIV-1基因組去除了包裝、逆轉錄和整合所需的順式作用序列而構建,能夠反式提供產(chǎn)生病毒顆粒所必需的蛋白;載體成分則與包裝成分互補,即含有包裝、逆轉錄和整合所需的順式作用序列,同時具有異源啟動子控制下的多克隆位點及在此位點插入的目的基因。將包裝成分與載體成分的多個質(zhì)粒共轉染包裝細胞,即可在細胞上清中收獲攜帶目的基因的復制缺陷型慢病毒載體顆粒。

慢病毒表達載體包含了包裝、轉染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質(zhì)??商峁┧械霓D錄并包裝RNA 到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒,需要利用表達載體和包裝質(zhì)粒同時共轉染細胞,在細胞中進行病毒的包裝,包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外的培養(yǎng)基中,離心取得上清液后,可以直接用于宿主細胞的感染,目的基因進入到宿主細胞之后,經(jīng)過反轉錄,整合到基因組,從而高水平的表達效應分子。

對于一些較難轉染的細胞,如原代細胞、干細胞、不分化的細胞等,能大大提高目的基因轉導效率,而且目的基因整合到宿主細胞基因組的幾率大大增加,這就為RNAi,cDNA 克隆以及報告基因的研究提供了一個有利的途徑。有時病毒感染細胞效率較低,這時可使用病毒感染增強劑Envirus來提高病毒的感染效率。

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