2003年，在高希希執(zhí)導(dǎo)的電視劇《歷史的天空》中飾演反一號“萬古碑”，為人所熟知。

2004年，參演電視劇《搭錯車》，飾演反一號蘇民生。

2007年，出演高希希執(zhí)導(dǎo)的倫理情感劇《男人底線》，飾演陰冷頑固的趙通達(dá)。

2007年，參演導(dǎo)演高希希執(zhí)導(dǎo)的電視劇《紙醉金迷》，飾演一個投機(jī)倒把的奸商。

2009年，在古裝劇《三國》中成功飾演劉備。

2010年，于和偉、羅海瓊領(lǐng)銜主演親情劇《幸福在路上》。

2010年，蘇巖、于和偉、王麗坤、沙溢等聯(lián)袂主演心理諜戰(zhàn)劇《青盲》，飾演張海峰。

2010年10月18日，林永健、何賽飛、辛柏青、于和偉主演的47集電視連續(xù)劇《老馬家的幸福往事》舉行北京電視臺首播發(fā)布會。

2011年，與楊童舒、李依曉、霍青等主演都市親情大戲《天下人家》，劇中，李依曉和于和偉飾演兄妹。

2011年，獲南方盛典最佳男演員獎《幸福在路上》。

2011年，與劉威葳、劉鈞、呂中、趙亮等演員聯(lián)合出演家庭情感電視連續(xù)劇《大家庭》。

2012年5月22日獲得MSN星月年度最具價值男演員獎。

2013年，于和偉、王麗坤領(lǐng)銜主演抗日諜戰(zhàn)劇《零下三十八度》，劇中飾演的“非典型”特工。

2013年，由劉雪松導(dǎo)演，于和偉、王麗坤、宋春麗等演員領(lǐng)銜主演都市時尚情感劇《愛的多米諾》，在劇中飾演玩具設(shè)計師戴骨順。

2013年，于和偉、劉濤領(lǐng)銜主演的都市情感勵志大劇《下一站婚姻》，劇中于和偉變身“恐婚族”，對有著同樣離異經(jīng)歷的單身母親“鄧草草”（劉濤飾）暗生情愫。

2014年，于和偉主演《刑警隊長》。于和偉在劇中飾演男主角刑警隊長顧銘，率領(lǐng)隊友屢破大案保衛(wèi)城市安全，還是一位愛妻兒孝順父母的好男人。

2015年，于和偉飾演《搜索連》中鐵血師長吳休葆，被贊演的尸體都有不一樣的味道。^[5]

2015年，于和偉主演《追擊者》中反一號曹若飛。^[6]

2015年，于和偉在大型古裝神話劇《封神》中飾演姜子牙一角^[7]。

2015年8月9日，于和偉憑借《下一站婚姻》獲第十七屆華鼎獎當(dāng)代劇最佳男演員獎。^[8]9月8日，于和偉紅色西裝亮相時尚星秀盛典，并獲得年度最具實力男演員獎。同年，主演的《警花與警犬》開機(jī)，他在劇中飾演女子訓(xùn)犬隊隊長杜飛。^[9]

2016年3月2日，于和偉出演的古裝大劇《軍師聯(lián)盟》在橫店舉行開機(jī)儀式后立馬投入緊張的拍攝。^[10]

2017年，在電影《建軍大業(yè)》中飾演陳獨(dú)秀^[11]。

2017年10月，于和偉領(lǐng)銜出演的電視劇《絕不放手》在江蘇常州舉行了開機(jī)儀式。^[12]