工作小結(jié)

一、草莓苗的無性繁殖——不定芽的分化

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1  材料

以草莓為材料（本實(shí)驗(yàn)室提供），取新莖、莖尖生長點(diǎn)（靠近莖尖生長點(diǎn)的少部分莖）做外植體。

1.2 培養(yǎng)條件：

1.2.1莖段分化：（ST） MS + 6-BA(2.5 mg/L)+ IAA(1.0 mg/L)

（ST2）MS (1/2大量)+ 6-BA(2.5 mg/L)+ IAA(1.0 mg/L)

1.2.2莖尖分化：（SI1）MS + 6-BA(0.5 mg/L)+ IAA(0.05 mg/L)

1.3 實(shí)驗(yàn)方法：

（1）將原先培養(yǎng)瓶中的草莓苗（剝?nèi)ト~片）或剛長成的小芽苗有選擇性的接種到新的培養(yǎng)基中。

（2）材料處理方法

①直接繼代培養(yǎng)：即分化的芽苗去葉去根后，直接轉(zhuǎn)入新的繼代培養(yǎng)基上。

②莖段培養(yǎng)：即分化的芽苗除去葉片、去根后，將莖段切為數(shù)段再轉(zhuǎn)入新的繼代培養(yǎng)基上。

2 結(jié)果與分析：

2.1  MS培養(yǎng)基生根植株。見圖1、圖2

圖1   MS                             圖2   MS

2.2  ST、ST2培養(yǎng)基處理的莖段均會產(chǎn)生大量新生芽苗。見圖3、圖4

圖3   ST                              圖4   ST2  

2.2.1 出芽時間及數(shù)量估計

將芽叢分成單株，見圖5、圖6、圖7、圖8（以ST2中芽苗計數(shù)）接種35天

圖6中芽苗可數(shù)為46顆，不包括不可數(shù)（無法明顯辨認(rèn)）。且可繼續(xù)進(jìn)行分化。

   圖5  莖段分化出的芽叢                     圖6 芽叢

圖7  單芽簇                             圖8 單芽苗

2.2.2  ST與ST2分化培養(yǎng)基中產(chǎn)生新芽的形態(tài)不同。如圖3、圖4。ST中產(chǎn)生新芽的同時，葉片形態(tài)較大。ST2 中的葉片形態(tài)較ST 中的葉片形態(tài)小。

2.2.3  ST2 分化培養(yǎng)基在處理莖段過程中，莖段中部及形態(tài)學(xué)上端變成紅色，同時期新生葉片葉脈處，葉柄變紅，有產(chǎn)生愈傷組織的趨勢，10天后分化出芽苗（圖9、圖10）或者莖段與培養(yǎng)基接觸部位表層產(chǎn)生紅色顆粒狀愈傷組織，并分化出芽苗（圖11、圖12）

圖9  ST2                                 圖10   ST2

        圖11 ST2                                 圖12    ST2

2.3  SI1分化培養(yǎng)基。需要指出的是在取莖尖生長點(diǎn)時，由于前期無法正確把握位置，故該外植體可能帶有少部分靠近莖尖生長點(diǎn)的莖。部分外植體培養(yǎng)10天左右，材料表層出現(xiàn)紅色，25天后長出紅色的愈傷組織（不是大量，只是一些），40天后開始長出芽苗（圖13、圖14、圖15）。部分外植體培養(yǎng)20天后，不產(chǎn)生愈傷組織，直接長出芽苗（圖16）

圖13  SI1（圖右側(cè)紅色愈傷組織）                    圖14 SI1

圖15  不明顯的愈傷組織                         圖16 直接長出芽苗

3 討論

3.1  ST、ST2培養(yǎng)基均可穩(wěn)定產(chǎn)生大量新生芽苗。但是部分處理莖段沒有達(dá)到預(yù)期設(shè)想。可能與天氣變冷，植株進(jìn)入休眠期有關(guān)?？梢詫⑦@部分外植體舍棄。

3.2  ST2培養(yǎng)基中葉片較ST中形態(tài)較小，可能由于是大量元素減半，影響葉片生長。ST中葉片伸展過程中會將芽叢從培養(yǎng)基中頂出，如果不及時轉(zhuǎn)苗，會造成芽苗無法吸收營養(yǎng)而死亡。ST2中此類現(xiàn)象亦存在，但是發(fā)生概率小。

3.2  對ST培養(yǎng)基單位時間內(nèi)芽苗增長數(shù)量進(jìn)行詳細(xì)統(tǒng)計（已有初步數(shù)據(jù)，統(tǒng)計正在進(jìn)行中），已初步確定最優(yōu)培養(yǎng)基。

3.3  對ST培養(yǎng)基中產(chǎn)生少量愈傷組織分析，可能是因?yàn)榧?xì)胞分裂素加入量過大，導(dǎo)致細(xì)胞分裂活動劇烈，芽苗分化不經(jīng)過愈傷組織而直接產(chǎn)生。減小6-BA含量，與ST做比較。

3.4  將新生芽苗大量接種至MS培養(yǎng)基誘導(dǎo)生根，長成成株，提供大量的莖尖生長點(diǎn)，為無毒苗的繁殖做好準(zhǔn)備。由于莖尖生長點(diǎn)剝離難度較大，成株莖尖生長點(diǎn)較為簡便。

4 計劃

4.1  調(diào)整6-BA 、IAA濃度。見下表（mg/L）

4.2  參照多篇文獻(xiàn)，草莓外植體不定芽誘導(dǎo)多采用6-BA（0.1、0.5、1.0、2.0、3.0 mg/L）IAA（0.05、0.1、1.0 mg/L）。其中IAA還有IBA、NAA、CTK代替。作者認(rèn)為每種激素都有各自的最適比例。故本實(shí)驗(yàn)中，作者僅采用IAA作為生長素使用。

5  師說

二、愈傷組織及其胚狀體的誘導(dǎo)

1  實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

以草莓為材料（本實(shí)驗(yàn)室提供），取葉柄、葉片、托葉做外植體。

1.2 培養(yǎng)條件

SY系列：

MS + 6-BA(0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mg/L) + 2,4-D(2.0 mg/L) （SY1-SY5）

MS + 6-BA（1.0、2.0、 3.0、4.0 mg/L）+ 2,4-D(3.0 mg/L)（SY6-SY9）

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

取草莓葉柄、葉片、托葉外植體，在SY系列培養(yǎng)基上誘導(dǎo)，使之產(chǎn)生愈傷組織。

2    結(jié)果與分析

2.1  SY6-SY9

圖17   SY6                               圖18   SY6

圖19  SY8                                圖20  SY8

2.2  SY1-SY5

圖21  SY2                            圖22  SY4

圖23  SY4                            圖24  SY5

圖25 SY2                 圖26  SY2

圖27  SY3                            圖28  SY3

3    討論

3.1  綜上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，均未出現(xiàn)明顯的分化現(xiàn)象。

(1.0 / 2.0 = 6-BA 1.0 + 2,4-D 2.0 )

3.1.1 經(jīng)對比，發(fā)現(xiàn)2,4-D為3.0 mg/L的SY6-SY9誘導(dǎo)愈傷組織沒有為2.0 mg/L的SY1-SY5的好?？赡苁怯捎?span lang="EN-US">2,4-D濃度過高抑制細(xì)胞的脫分化。

3.1.2 SY系列培養(yǎng)基中愈傷組織均未為出現(xiàn)分化現(xiàn)象。但是部分SY培養(yǎng)基有誘導(dǎo)細(xì)胞再分化的趨勢。推測是由于2,4-D濃度過高抑制細(xì)胞的再分化能力。減小其濃度。見下表。

3.2 ST培養(yǎng)基有誘導(dǎo)出芽苗的功能，如果將SY系列中的愈傷組織轉(zhuǎn)入ST中進(jìn)行繼代培養(yǎng)，是否可以成功誘導(dǎo)出芽苗。

4 師說

培養(yǎng)基列表

ST   MS + 6-BA(2.5 mg/L)+ IAA(1.0 mg/L)

ST2  MS (1/2大量)+ 6-BA(2.5 mg/L)+ IAA(1.0 mg/L)

SI1  MS + 6-BA(0.5 mg/L)+ IAA(0.05 mg/L)

SY1  MS + 6-BA(0.5 mg/L) + 2,4-D(2.0 mg/L)

SY2  MS + 6-BA(1.0 mg/L) + 2,4-D(2.0 mg/L)

SY3  MS + 6-BA(2.0 mg/L) + 2,4-D(2.0 mg/L)

SY4  MS + 6-BA(3.0 mg/L) + 2,4-D(2.0 mg/L)

SY5  MS + 6-BA(4.0 mg/L) + 2,4-D(2.0 mg/L)

SY6  MS + 6-BA（3.0 mg/L）+ 2,4-D(3.0 mg/L)

SY7  MS + 6-BA（2.0 mg/L）+ 2,4-D(3.0 mg/L) 

SY8  MS + 6-BA（1.0 mg/L）+ 2,4-D(3.0 mg/L)

SY9  MS + 6-BA（4.0 mg/L）+ 2,4-D(3.0 mg/L)