信號(hào)通路研究在生命科學(xué)基礎(chǔ)研究領(lǐng)域具有舉足輕重的地位,Western Blotting 是科學(xué)研究中必備實(shí)驗(yàn)技術(shù),可直觀明了的檢測(cè)靶標(biāo)的變化。 然而很多時(shí)候,當(dāng)深入研究某個(gè)通路時(shí),一次會(huì)檢測(cè)多個(gè)重要潛在靶標(biāo),以監(jiān)測(cè)通路的變化以及干預(yù)方式的有效性與否。但非常令人頭疼的是,很多信號(hào)節(jié)點(diǎn)蛋白的分子量十分接近,比如 ERK1/2 和 S6 核糖體蛋白以及 Akt ,這需要轉(zhuǎn)膜后根據(jù)分子量大小把膜上目的靶標(biāo)一個(gè)個(gè)小心翼翼裁開(kāi)并分別孵育抗體,容易裁錯(cuò)且過(guò)程繁瑣,更甚者這些一抗很多時(shí)候還是不同種屬的,那么又要在孵育二抗時(shí)具體區(qū)分。太可怕了,這哪是做 WB 呀,分明是考驗(yàn)刀工和眼力呀。寶貴的時(shí)間,珍貴的樣本,萬(wàn)一弄混,前功盡棄! 正因?yàn)檫@樣,CST 為大家提供了解決這個(gè)問(wèn)題的有力工具——PathScan? Multiplex Western Cocktail。一管抗體 cockcail 中混合有多種同種來(lái)源的一抗, 可同時(shí)檢測(cè)多個(gè)靶標(biāo)。
2、無(wú)需裁膜,所有混合抗體均為同種來(lái)源,只需一種二抗,一次孵育; 3、無(wú)需 strip 膜重新孵一抗,多重靶標(biāo)一網(wǎng)打盡; 如 PathScan? Multiplex Western Cocktail I #5301這個(gè)產(chǎn)品可以同時(shí)檢測(cè) Phospho-p90RSK, Phospho-Akt, Phospho-p44/42MAPK (Erk1/2) 及 Phospho-S6 Ribosomal 等 4 個(gè)靶標(biāo)。Akt 在控制生存和凋亡平衡中起著重要作用。該蛋白激酶被胰島素、各種生長(zhǎng)、存活因子活化。磷脂結(jié)合可以調(diào)控Akt的激活,并在該蛋白羧基末端絲氨酸(473)位點(diǎn)磷酸化。Erk1 /2 在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)分化中起了重要作用。許多細(xì)胞外信號(hào)分子都能激活 MAPK ,包括生長(zhǎng)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子,細(xì)胞因子,激素和神經(jīng)傳導(dǎo)物質(zhì)。 MAPK 活化的發(fā)生是通過(guò)單個(gè)上游 MAP 的激酶 (MEK) 對(duì) T*EY* 序列中蘇氨酸和酪氨酸的磷酸化而實(shí)現(xiàn)的。p44/42 MAPK 的其中一個(gè)下游靶點(diǎn)是 p90RSK。此外,為有效且可持續(xù)地促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和分裂,生長(zhǎng)因子和有絲分裂原必須上調(diào)翻譯水平。這些刺激會(huì)誘導(dǎo) p70 S6 kinase 的活化,其又能磷酸化 S6 核糖體蛋白。而S6的磷酸化會(huì)促進(jìn)翻譯的增強(qiáng)。如下圖所示,用胰島素處理 CHO 細(xì)胞,并用 wortmannin,rapamycin,U0126分別進(jìn)行干預(yù)。可以看到磷酸化的 Akt,ERK1/2,及 S6 相應(yīng)的發(fā)生了變化。
#5300 PathScan? Bcr/Abl Activity Assay: Phospho-c-Abl, Phospho-Stat5 and Phospho-CrkL Multiplex Western Detection Cocktail; #5301 PathScan?Multiplex Western Cocktail I: Phospho-p90RSK, Phospho-Akt, Phospho-p44/42 MAPK(Erk1/2) and Phospho-S6 Ribosomal Protein Detection Cocktail I; #5302 PathScan? Multiplex Western Cocktail II: Phospho-p90RSK, Phospho-p53,Phospho-p38 MAPK and Phospho-S6 Ribosomal Protein Detection Cocktail II; #5303 PathScan? Multiplex Western Cocktail III: Phospho-Stat1, Phospho-SAPK/JNK,Phospho-S6 Ribosomal Protein and Phospho-HSP27 Detection Cocktail III; #5304 PathScan? PDGFR Activity Assay: Phospho-PDGFR, Phospho-SHP2, Phospho-Akt, and Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) Multiplex Western Detection Cocktail II; |
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來(lái)自: 申棟帥 > 《Western Blotting》