植物組培外植體消毒詳解

外植體的消毒

植物組織培養(yǎng)用的外植體大部分取自田間，表面上附著大量的微生物，這是

組織培養(yǎng)的一大障礙。

因此在材料接種培養(yǎng)前必須要消毒處理，

消毒一方面要求

把材料表面上的各種微生物殺滅，

同時又不能損傷或只輕微損傷組織材料而不影

響其生長。因此，外植體的消毒處理是植物組織培養(yǎng)工作中的重要一環(huán)。

（

1

）常用的消毒劑

常用的消毒劑如下表所示。理想的消毒劑應(yīng)具有消毒效果好，易被無菌水沖

洗掉或能自行分解，對材料損傷小，對人體及其他生物無害，來源廣泛，價格低

廉。

常用消毒劑的使用方法及效果

①酒精

酒精是最常用的表面消毒劑，以

70%~75%

酒精殺菌效果最好，

95%

或無水

酒精會使菌體表面蛋白質(zhì)快速脫水凝固，

形成一層干燥膜，

阻止了酒精的繼續(xù)滲

入，殺菌效果大大降低。

酒精具有較強的穿透力，使菌體蛋白質(zhì)變性，殺菌效果好。同時它還具有較

強的濕潤作用，

可排除材料上的空氣，

利于其他消毒劑的滲入。

但酒精對植物材

料的殺傷作用也很大，

浸泡時間過長，

植物材料的生長將會受到影響，

甚至被酒

精殺死，使用時應(yīng)嚴(yán)格控制時間。但酒精不能徹底消毒，一般不單獨使用，多與

其他消毒劑配合使用。

②升汞

又稱氯化汞，

Hg2+

可以與帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)結(jié)合，使蛋白質(zhì)變性，從而殺死

菌體。

升汞的消毒效果極佳，

但易在植物材料上殘留，

消毒后需用無菌水反復(fù)多

次沖洗。升汞對環(huán)境危害大，對人畜的毒性極強，使用后應(yīng)做好回收工作。

③次氯酸鈉

次氯酸鈉是一種較好的消毒劑，它可以釋放出活性氯離子，從而殺死菌體。

其消毒能力很強，不易殘留，對環(huán)境無害。但次氯酸鈉溶液堿性很強，對植物材

料也有一定的破壞作用。

④漂白粉

漂白粉的有效成分是次氯酸鈣

[Ca(ClO)2]

，消毒效果很好，對環(huán)境無害。它

易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。

⑤過氧化氫

也稱雙氧水，消毒效果好，易清除，又不會損傷外植體，常用于葉片的消毒。

⑥新潔爾滅

這是一種廣普表面活性消毒劑，對絕大多數(shù)植物外植體傷害很小，殺菌效果

好。

（

2

）消毒方法

①莖尖、莖段及葉片等的消毒

消毒前先對植物組織進行修整，去掉不需要的部分，然后用自來水沖洗。對

于一些表面不光滑或長有絨毛的材料，

可用洗滌劑清洗，

必要時用毛刷充分刷洗，

硬質(zhì)材料可用刀刮。

消毒時在超凈臺上操作，先用

70%

酒精浸泡

10~30s

，

以無菌水沖洗

2~3

次，

然后按材料的老、嫩和枝條的堅實程度，分別采用

2%

次氯酸鈉浸泡

10~15min

或用

0.1%

升汞浸

5~10min

。消毒時要不斷攪動，使植物材料與消毒劑充分地接

觸。

若材料有絨毛，

最好在消毒液中加入幾滴

Tween-20

，

最后用無菌水沖洗

3~5

次。

②果實及種子的消毒

先用自來水沖洗

10~20min

，再用酒精迅速漂洗一下。果實用

2%

次氯酸鈉浸

10min

，后用無菌水沖洗

2~3

次。種子則先用

10%

次氯酸鈉浸泡

20~30min

，難

以消毒的可用

0.1%

升汞消毒

5~10min

。對于種皮太硬的種子，也可預(yù)先去掉種

皮，再用

4%

次氯酸鈉浸泡

8~10min

。

③花藥的消毒

用于組織培養(yǎng)的花藥多未成熟，其外面有花萼、花瓣或穎片保護，處于無菌

狀態(tài)。

消毒時將整個花蕾或幼穗用

70%

酒精浸泡數(shù)秒鐘，

然后用無菌水沖洗

2~3

次，再在漂白粉中浸泡

10min

，最后用無菌水沖洗

2~3

次。

④根及底下部器官的消毒

由于這類材料生長于土壤中，表面帶菌量大，消毒較為困難。可先用自來水

沖洗，

軟毛刷刷洗，

用刀切去損傷及污染嚴(yán)重部位，

再用酒精漂洗后，

置于

0.1%

升汞中浸

5~10min

或

2%

次氯酸鈉中浸

10~15min

，最后用無菌水沖洗

3

次。

在操作時要根據(jù)材料的大小、幼嫩、質(zhì)地等差異做出判斷后，再選擇適宜的

消毒劑種類、

濃度和消毒時間，

切不可生搬硬套。

消毒的最佳效果應(yīng)以最大限度

地殺死材料上的微生物，而又對材料的損傷最小為好