組培吧 · 月季！微型月季組培技術(shù)實(shí)例分享【附配方】

技術(shù)配方

馮歡·2015-08-07 18:58

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導(dǎo)讀：微型月季(Rosahybrida)是月季家族的新品種，為薔薇科薔薇屬多年生木本，落葉或半落葉常綠灌木。

本實(shí)驗(yàn)以黃色新品種微型月季為研究對(duì)象，探討不同外植體對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響，以及不同配比的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)、不定芽誘導(dǎo)和生根的影響，建立了高頻離體再生體系。本文已篩選出本實(shí)驗(yàn)最優(yōu)組培方法如下。

1 外植體材料

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

供試材料為黃色微型月季，選取12天葉齡的葉片。

1.2 材料處理

取微型月季枝條在自來(lái)水下沖洗干凈，用75%乙醇表面消毒30-40秒，再用0.1%升汞溶液滅菌2-6分鐘，無(wú)菌水沖洗3-5次。在無(wú)菌條件下將葉片剪成0.5厘米平方的小塊，并露出新鮮傷口。

2 方法

2.1 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件

誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基：MS + 6-BA 1.0mg/L + 2,4-D 3.0mg/L

不定芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)基：MS + 6-BA 1.0mg/L + NAA 0.1mg/L + TDZ 0.02mg/L

誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基：1/4MS + NAA 0.1mg/L

以上培養(yǎng)基均含蔗糖30g/L和瓊脂7g/L，pH5.8-6.2。

培養(yǎng)條件：為溫度(25±2)℃，光照16小時(shí)/天，光照強(qiáng)度為2000lx-3000lx。

2.2 愈傷組織誘導(dǎo)

選取經(jīng)處理的外植體接種于誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基上。培養(yǎng)30天，在顯微鏡下可觀察到所誘導(dǎo)出的愈傷組織顏色偏淺黃且比較透亮，呈圓顆粒狀，質(zhì)地飽滿?？蓪⒃摲N類型的愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基中進(jìn)行不定芽的誘導(dǎo)。

2.3 不定芽的誘導(dǎo)和增殖

外植體在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)30天后，挑選長(zhǎng)勢(shì)良好的愈傷組織，接種于不定芽的誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)，愈傷組織表面出現(xiàn)綠色芽點(diǎn)，繼續(xù)培養(yǎng)4-6周后可形成不定芽，誘導(dǎo)率可達(dá)92.6%。

2.4 生根誘導(dǎo)

將高1-2厘米且長(zhǎng)勢(shì)良好的再生苗移植到生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，幼苗經(jīng)過(guò)15天的培養(yǎng)便能長(zhǎng)出根，生根率為100%。

另外，活性炭對(duì)培養(yǎng)基中有害物質(zhì)具有吸附作用。因此，在誘導(dǎo)生根的過(guò)程中加入少量活性炭有利于根的生長(zhǎng)。

2.5 移栽煉苗

將再生根生長(zhǎng)狀況良好的微型月季幼苗取出，用流水緩慢地將根部殘留的培養(yǎng)基沖洗干凈(注意不要傷及根部)，移栽至土壤中煉苗1-7天。

3 總結(jié)

選取微型月季幼嫩離體葉片(葉齡12天)為外植體，以MS為基本培養(yǎng)基，研究不同配比的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)、不定芽誘導(dǎo)和生根培養(yǎng)的影響。結(jié)果表明：

A. 誘導(dǎo)愈傷組織的最佳培養(yǎng)基配比為6-BA 1.0mg/L + 2，4-D 3.0mg/L，誘導(dǎo)率為100%;

B. 6-BA在微型月季不定芽誘導(dǎo)中起著關(guān)鍵作用，誘導(dǎo)不定芽產(chǎn)生的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑最適配比為6-BA 1.0mg/L + NAA 0.1mg/L + TDZ 0.02mg/L，愈傷組織再分化率達(dá)到92.6%;

C. 生長(zhǎng)素對(duì)微型月季的生根有重要影響，以1/4MS + NAA 0.1mg/L為生根培養(yǎng)基可獲得100%的生根率。

實(shí)驗(yàn)最終建立了微型月季組織培養(yǎng)和高頻離體再生體系。

編者按：本文作者為馮歡，有小編整理發(fā)布，如有不便，敬請(qǐng)聯(lián)系！

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