生物制藥

1什么是生物技術(shù)制藥？

生物技術(shù)制藥:采用現(xiàn)代生物技術(shù)可以人為地創(chuàng)造一些條件,借助某些微生物、植物、動物來生產(chǎn)所需的醫(yī)藥品。

2什么是質(zhì)粒結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定？

質(zhì)粒結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定：指外源基因從質(zhì)粒上丟失或堿基重排、缺失所致工程菌性能的改變。

3什么是基因藥物？

基因藥物：即基因工程技術(shù)發(fā)展的產(chǎn)物，如基因治療劑、基因疫苗、反義藥物、核酶、淋巴因子、生長因子、激素和酶等。

4什么是多克隆抗體？

多克隆抗體：病原微生物含有多種抗原決定簇的抗原物質(zhì)，因此所得到的抗體制劑也是多種抗體的混合物，故稱多克隆抗體，即針對多種抗原決定簇的抗體。

5什么是透析培養(yǎng)？

透析培養(yǎng)：利用膜的半透性原理使培養(yǎng)物和培養(yǎng)基分離，其主要目的是通過去除培養(yǎng)液中的代謝產(chǎn)物來解除其對生產(chǎn)菌的不利影響。

6什么是轉(zhuǎn)化細胞系？

轉(zhuǎn)化細胞系：通過某個轉(zhuǎn)化過程形成的，常由于染色體斷裂變成異倍體，失去正常細胞特點，而獲得無限增殖能力。轉(zhuǎn)化過程可以是自發(fā)的和人工的，也可以直接從腫瘤組織中建立。

7什么是滅活疫苗？

滅活疫苗：即人們在獲得病毒以后，對其進行一定的處理，可以使病毒完全喪失活性，從而得到被殺死的病原微生物，進而制成滅活疫苗。通俗的說滅活疫苗就是一種被殺死的病毒，將其輸入人體，既不會使人染病，又可以促使人體產(chǎn)生抗體，抵御病毒入侵。

8什么是干擾素？

干擾素：人體細胞分泌的一種活性蛋白質(zhì)，具有廣泛的抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)活性，是人體防御系統(tǒng)的重要組成部分。根據(jù)其分子結(jié)構(gòu)和抗原性的差異分為α、β、γ、ω四個類型。

9什么是植物細胞工程？

植物細胞工程：以植物細胞為基本單位，應(yīng)用細胞生物學(xué)、分子生物學(xué)等理論和技術(shù)，在離體條件下進行培養(yǎng)、繁殖或人為的精細操作，使細胞的某些生物學(xué)特性按人們的意愿發(fā)生改變，從而改良品種、制造新品種、加速繁育植物個體或獲得有用物質(zhì)的一門科學(xué)或技術(shù)。

10什么是融合蛋白？

融合蛋白：蛋白質(zhì)氨基端是原核序列，羧基端是真核序列，這樣的蛋白質(zhì)是由一條短的原核多肽和真核蛋白結(jié)合在一起的，故稱融合蛋白。

11什么是抗生素？

抗生素：由微生物(如某些菌類植物)產(chǎn)生的能殺死或抑制某些微生物生長的物質(zhì)，如青霉素、鏈霉素等。

12什么是生物制藥？

生物制藥：把生物體內(nèi)的具有生物活性的基本物質(zhì)，保持原來的結(jié)構(gòu)和功能，又能在含有多種物質(zhì)的液相或固相中較高純度的分離出來。它是一項嚴格、細致、復(fù)雜的工藝過程，涉及物理、化學(xué)、生物學(xué)、工程等方面的知識和操作技術(shù)。

13什么是單克隆抗體？單克隆抗體有哪些不足？

單克隆抗體：是將抗體產(chǎn)生細胞與具有無限增殖能力的骨髓瘤細胞相融合，通過有限稀釋法及克隆化使雜交瘤細胞成為純一的單克隆細胞系而產(chǎn)生的。針對一個抗原決定簇，具有高度特異性、均一性。

單克隆抗體的不足：單克隆抗體均是鼠源性抗體，應(yīng)用于人體內(nèi)可產(chǎn)生人抗鼠抗體，加速了排斥反應(yīng)，在人體內(nèi)半衰期只有5-6小時，難以維持有效藥物作用靶組織時間；完整的抗體分子，即Ig的相對分子質(zhì)量過大，難以穿透實體腫瘤組織，達不到有效的治療濃度。

14什么是貼壁培養(yǎng)？

貼壁培養(yǎng)：讓細胞貼附在某種基質(zhì)上生長繁殖的培養(yǎng)方法。它適用于一切貼附依賴性細胞，也適用于兼性貼壁細胞。

15什么是細胞融合技術(shù)？

細胞融合技術(shù)：是指兩個或兩個以上的細胞合并成一個細胞的過程。通過人為的施加生物、化學(xué)或物理等誘導(dǎo)細胞融合的因素，提高不同基因型細胞的融合頻率并使這形成單核雜種細胞的技術(shù)，稱之為體細胞融合技術(shù)。

16什么是人-鼠嵌合抗體？

人-鼠嵌合抗體：抗原抗體結(jié)合功能—抗體可變區(qū)（V），同種性免疫源性—抗體穩(wěn)定區(qū)（C），在基因水平上將鼠源單抗的H 和L鏈可變區(qū)基因分離出來，分別與人Ig的H 和L鏈的穩(wěn)定區(qū)（C）基因連接成人-鼠嵌合抗體的H 和L鏈基因，再共轉(zhuǎn)染骨髓瘤細胞，就能表達完整人-鼠嵌合抗體。

17什么是生物制品？

生物制品：指以微生物、寄生蟲、動物毒素、生物組織作為起始原料，采用生物學(xué)工藝或分離純化技術(shù)制備，并以生物學(xué)技術(shù)和分析技術(shù)控制中間產(chǎn)物和成品質(zhì)量制成的生物活性制劑。

18什么是質(zhì)粒分裂不穩(wěn)定？

質(zhì)粒分裂不穩(wěn)定：指工程菌分裂時出現(xiàn)一定比例不含質(zhì)粒子代菌的現(xiàn)象。

19什么是反義藥物？

反義藥物：寡聚核苷酸，主要指反義寡核苷酸, 即其核苷酸序列可與靶mRNA或靶DNA互補, 抑制或封閉基因的轉(zhuǎn)換和表達,或誘導(dǎo)RnaseH識別或切割mRNA, 使其喪失功能。

20什么是逆轉(zhuǎn)錄法？

逆轉(zhuǎn)錄法：就是先分離純化目的基因的 mRNA，在反轉(zhuǎn)錄成 cDNA，然后進行 cDNA 的克隆表達。

21生物技術(shù)制藥的特征是什么？

答：⑴高技術(shù)，主要表現(xiàn)在其高知識層次的人才和高新的技術(shù)手段。生物制藥是一個知識密集、技術(shù)含量高、多學(xué)科高度綜合互相滲透的新興產(chǎn)業(yè)。

⑵高投入，生物制藥是一個投入相當大的產(chǎn)業(yè)，主要用于新產(chǎn)品的研究開發(fā)及醫(yī)藥廠的建造和設(shè)備儀器的配置方面。雄厚的資金是生物藥品開發(fā)成功的必要保障。

⑶長周期，一種新藥周期較長，從開始研制到最終轉(zhuǎn)化為產(chǎn)品要經(jīng)過很多環(huán)節(jié)，一般需要8-10年，甚至更多時間。

⑷高風險，生物醫(yī)藥產(chǎn)品的開發(fā)孕育著較大的不確定風險。一般來講，一個生物工程藥品的成功率僅有5%-10%，研制時間卻需8-10年，投資1-3億美元。

⑸高收益，生物技術(shù)藥物的利潤回報率很高，具有巨大的社會經(jīng)濟效益。一種新生物藥品一般上市后2-3年即可收回所有投資，尤其是擁有新產(chǎn)品、專利產(chǎn)品的企業(yè)，一旦開發(fā)成功便會形成技術(shù)壟斷優(yōu)勢，利潤回報能高達10倍以上。

22生物技術(shù)藥物分為哪些類型？

答：采用DNA重組技術(shù)或其他生物技術(shù)研制的蛋白質(zhì)或核酸類藥物稱為生物技術(shù)藥物。按功能用途可以分為：治療藥物；預(yù)防藥物；診斷藥物。

23生物技術(shù)在制藥中有哪些應(yīng)用？

答：㈠基因工程制藥，利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)藥物的途徑：一是用克隆的基因表達生產(chǎn)有用的肽類和蛋白質(zhì)藥物或疫苗；二是利用基因工程技術(shù)改造傳統(tǒng)的制藥工業(yè)。主要內(nèi)容有：⑴基因工程藥物品種的開發(fā)；⑵基因工程疫苗；⑶基因工程抗體；⑷基因診斷與基因治療；⑸應(yīng)用基因工程技術(shù)建立新藥的篩選模型；⑹應(yīng)用基因工程技術(shù)改良菌種，產(chǎn)生新的微生物藥物；⑺基因工程技術(shù)在改進藥物生產(chǎn)工藝中的應(yīng)用；⑻利用轉(zhuǎn)基因動、植物生產(chǎn)蛋白質(zhì)類藥物。

㈡細胞工程制藥，細胞工程是在細胞水平上的生物工程，是在對細胞結(jié)構(gòu)的深入認識和細胞遺傳學(xué)的發(fā)展的基礎(chǔ)上建立起來的。主要內(nèi)容有：單克隆抗體技術(shù)；動物細胞培養(yǎng)；植物細胞培養(yǎng)生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物。

㈢酶工程制藥，利用酶或細胞、細胞器所具有的催化功能用于藥品工業(yè)化生產(chǎn)、監(jiān)測的技術(shù)稱為酶工程，是酶學(xué)與化工技術(shù)結(jié)合的產(chǎn)物。

㈣發(fā)酵工程制藥，發(fā)酵工程也稱微生物工程，它在原有發(fā)酵的基礎(chǔ)上又采用了新技術(shù)使工藝水平大大提高。新技術(shù)主要應(yīng)用于工藝改進、新藥研制和菌種改造。

24什么是嵌合抗體？

答：將VL基因克隆到人IgCL基因表達載體上，將VH基因克隆到人Igγ1的C基因真核表達載體上，再將人-鼠嵌合的V-C區(qū)基因質(zhì)粒DNA等量混合，在脂質(zhì)體介導(dǎo)下共轉(zhuǎn)染骨髓瘤細胞SP2/0，轉(zhuǎn)染后用霉酚酸進行篩選，形成集落的細胞即為共轉(zhuǎn)染細胞，所分泌的抗體為嵌合抗體。

25基因工程技術(shù)中常用的基因載體有哪些？

答：質(zhì)粒；λ噬菌體；黏性質(zhì)粒；M13噬菌體；酵母；真核細胞病毒載體

26按藥物的化學(xué)本質(zhì)和化學(xué)特性可分哪些類型？

答：1)氨基酸及其衍生物類藥物；2)多肽及蛋白質(zhì)類藥物；3)酶與輔酶類藥物；4)核酸及其降解物和衍生物類藥物；5)糖類藥物；6)脂類藥物；7)細胞生長因子類；8)生物制品類。

27酶類藥物的生產(chǎn)方法有哪些？

答：

28改造鼠源性單克隆抗體的目的是什么？

答：降低單克隆抗體的免疫源性；降低單克隆抗體的相對分子量。

29基因工程菌的培養(yǎng)方式主要有哪些？

答：分批培養(yǎng)：即分批發(fā)酵，是指將所有的物料（除空氣、消沫劑、調(diào)節(jié)pH的酸堿物外）一次加入發(fā)酵罐，然后滅菌、接種、培養(yǎng)，最后將整個罐的內(nèi)容物放出，進行產(chǎn)物回收。清罐結(jié)束后，重新開始新的裝料發(fā)酵的發(fā)酵方式。

補料分批培養(yǎng)：是將種子接入發(fā)酵反應(yīng)器中進行培養(yǎng),經(jīng)過一段時間后間歇或連續(xù)地補加新鮮培養(yǎng)基，使菌體進一步生長的方法。

連續(xù)培養(yǎng)：是將種子接入發(fā)酵反應(yīng)器中，攪拌培養(yǎng)至菌體濃度達一定程度后，開動進料和出料蠕動泵，以一定稀釋率進行不間斷培養(yǎng)。

透析培養(yǎng)：利用膜的半透性原理使培養(yǎng)物和培養(yǎng)基分離，其主要目的是通過去除培養(yǎng)液中的代謝產(chǎn)物來解除其對生產(chǎn)菌的不利影響。

固定化培養(yǎng)：運用固定化技術(shù)，將基因工程菌固定化后，進行培養(yǎng)的方法。

30現(xiàn)代生物技術(shù)制藥及現(xiàn)代生物技術(shù)具體包括哪些內(nèi)容？

答：現(xiàn)代生物技術(shù)制藥：包括現(xiàn)代生物制藥技術(shù)的基礎(chǔ)理論和基本技術(shù)。對不同來源的藥物資源或原料（包括動物、植物、微生物和海洋生物），從化學(xué)結(jié)構(gòu)或組分、性質(zhì)、操作技術(shù)、技術(shù)路線、工藝過程等進行論述。介紹各種工藝過程和工藝路線。

現(xiàn)代生物技術(shù)包括：⑴重組DNA技術(shù)；

⑵細胞和原生質(zhì)體融合技術(shù)；

⑶酶和細胞的固定化技術(shù)；

⑷植物脫毒和快速繁殖技術(shù)；

⑸動物和植物細胞的大量培養(yǎng)技術(shù)；

⑹動物胚胎工程技術(shù)；

⑺現(xiàn)代微生物發(fā)酵技術(shù)；

⑻現(xiàn)代生物反應(yīng)工程和分離工程技術(shù)；

⑼蛋白質(zhì)工程技術(shù)；

⑽海洋生物技術(shù)。

31控制基因工程菌的發(fā)酵工藝的目的及主要內(nèi)容是什么?各有什么影響？

答：目的：是使外源基因高效表達。它不僅涉及宿主載體和克隆基因之間的相互關(guān)系還和環(huán)境有關(guān)。

工藝要求：外源基因既高效表達，又有利于產(chǎn)品分離純化。

最佳化的工藝是獲得:最快周期、最高產(chǎn)量、最好質(zhì)  量、最低消耗、最大安全性、最周全的廢物處理效果、最佳速度和最低失敗率等。

對發(fā)酵影響較大的幾個因素有：培養(yǎng)基的影響；接種量的影響；⒊溫度的影響；溶解氧的影響；誘導(dǎo)時機的影響；pH的影響。

32基因工程藥物制造的主要程序有哪些？

答：⑴目的基因的克??；

⑵構(gòu)建DAN重組體；

⑶DAN重組體轉(zhuǎn)入宿主菌；

⑷構(gòu)建工程菌；

⑸工程菌發(fā)酵；

⑹表達產(chǎn)物的分離純化；

⑺除菌過濾；

⑻半成品檢定；

⑼成品檢定；

⑽包裝。

33影響目的基因在大腸桿菌中表達的因素有哪些？

答：外源基因表達產(chǎn)量與細胞濃度和細胞表達產(chǎn)量呈正相關(guān)；單個細胞產(chǎn)量取決于： ⑴外源基因的拷貝數(shù)；⑵ 外源基因的表達效率：①啟動子的強弱、②核糖體接合位點的有效性、③SD序列和起始密碼ATG的間距、④密碼子組成；⑶表達產(chǎn)物的穩(wěn)定性；⑷細胞代謝負荷；⑸工程菌的培養(yǎng)條件。

34質(zhì)粒不穩(wěn)定分為哪兩類，如何解決質(zhì)粒不穩(wěn)定性？

答：質(zhì)粒不穩(wěn)定分兩類為：分裂不穩(wěn)定、結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定；

    解決質(zhì)粒不穩(wěn)定性：選擇合適的宿主菌；選擇合適的載體；選擇壓力；分階段控制培養(yǎng)；控制培養(yǎng)條件；固定化。

35影響基因工程菌發(fā)酵的因素有哪些？如何控制發(fā)酵的各種參數(shù)？

答：對發(fā)酵影響較大的幾個因素有：培養(yǎng)基的影響；接種量的影響；溫度的影響；溶解氧的影響；誘導(dǎo)時機的影響；誘導(dǎo)表達程序的影響；pH的影響。

控制發(fā)酵的各種參數(shù)：

⑴培養(yǎng)基的組成既要提高工程菌的生長速率，又要保持工程菌的穩(wěn)定性，使外源基因高效表達；

⑵接種量的大小影響發(fā)酵的產(chǎn)量和發(fā)酵周期。接種量小，菌體延遲期較長，使菌齡老化，不利于外源基因表達；接種量大，可縮短生長延遲期，菌體迅速繁衍，很快進入對數(shù)生長期，適于表達外源基因；接種量過高，使菌體生長過快，代謝物積累過多，反而會抑制后期菌體的生長。

⑶溫度對發(fā)酵過程的影響是多方面的。它影響各種酶的反應(yīng)速度，改變菌體代謝產(chǎn)物的反應(yīng)方向，影響代謝調(diào)控機制。適宜的發(fā)酵溫度是既適合菌體的生長，又適合代謝產(chǎn)物合成的溫度。高溫或低溫都會使發(fā)酵異常，影響終產(chǎn)物的形成并導(dǎo)致減產(chǎn)。溫度還影響蛋白質(zhì)的活性和包含體的形成。

⑷對于好氧發(fā)酵,溶解氧濃度是重要的參數(shù)。好氧微生物利用溶解于培養(yǎng)液中的氧氣進行呼吸。若能提高溶氧速度和氧的利用率，則能提高發(fā)酵產(chǎn)率。發(fā)酵時，隨DO2濃度的下降，細胞生長減慢，ST值下降，發(fā)酵后期下降幅度更大。外源基因的高效表達需要大量的能量，促進細胞的呼吸作用，提高對氧的需求。維持較高的DO2值，才能提高工程菌的生長，利于外源蛋白產(chǎn)物的形成。采用調(diào)節(jié)攪拌轉(zhuǎn)速的方法,可改變培養(yǎng)過程中的氧供給，提高活菌產(chǎn)量。

⑸一般在對數(shù)生長期或?qū)?shù)生長后期升溫誘導(dǎo)表達。在對數(shù)生長期，細胞快速繁殖，直到細胞密度達到109/個為止，這時菌體數(shù)目倍增，對營養(yǎng)和氧需求量急增，營養(yǎng)和氧成了菌群旺盛代謝的限制因素。

⑹熱誘導(dǎo)的程序提高外源蛋白表達量。

⑺根據(jù)工程菌的生長和代謝情況，對pH進行適當?shù)恼{(diào)節(jié)。如采取兩段培養(yǎng)工藝，培養(yǎng)前期重點是優(yōu)化工程菌的生長條件，其最佳pH在6.8～7.4左右;培養(yǎng)后期重點是優(yōu)化外源蛋白的表達條件,其最佳pH為6.0～6.5。

36簡述制備單克隆抗體的基本步驟。

答：一、抗原與動物免疫：制備特定抗原的單克隆抗體，首先要制備用于免疫的適當抗原，再用抗原進行動物免疫；

二、細胞融合與雜交瘤細胞的選擇性培養(yǎng)；

三、篩選陽性克隆與克隆化：篩選陽性克隆常用檢測方法有免疫酶技術(shù)、免疫熒光技術(shù)、放射免疫技術(shù)等。

四、雜交瘤細胞與抗體性狀的鑒定：雜交瘤細胞鑒定：染色體分析。它是鑒定的客觀指標，了解分泌抗體的能力。

五、單克隆抗體的大量制備：體外培養(yǎng)法可獲的10μg/ml抗體

        體內(nèi)誘生法可獲的5～20mg/ml抗體

六、單克隆抗體的純化：依單抗IgG類和亞類不同，選各種不同的純化方法。

37蛋白質(zhì)工程制藥包含哪些內(nèi)容？

答：A、臨床前新藥和靶的發(fā)現(xiàn)、藥物作用模式、毒理學(xué)研究；

    B、臨床研究方面：疾病特異性蛋白作為有效患者選擇的依據(jù)和臨床試驗的標志；

    C、按照蛋白質(zhì)譜來分類患者，并預(yù)測藥物作用療效；

38對由基因重組技術(shù)所獲得的蛋白質(zhì)藥物產(chǎn)品進行鑒定時，常做哪些項目分析？

答：㈠生物活性測定：這是保證基因工程藥物產(chǎn)品有效性的重要手段，所以多肽或蛋白質(zhì)藥物的生物學(xué)活性是蛋白質(zhì)藥物的重要質(zhì)量控制指標。

㈡理化性質(zhì)鑒定：非特異性鑒別；特異性鑒別；相對分子量測定；等電點測定；肽圖分析；氨基酸組成分析；部分氨基酸序列分析；蛋白質(zhì)二硫鍵分析；

㈢蛋白質(zhì)含量測定；

㈣蛋白質(zhì)純度分析；

㈤雜質(zhì)檢測：蛋白質(zhì)類雜質(zhì)；非蛋白類雜質(zhì)；

㈥穩(wěn)定性考察；

㈦產(chǎn)品一致性的保證。

39基因工程制藥包含哪些內(nèi)容？

答：⑴基因工程藥物品種的開發(fā)；⑵基因工程疫苗；⑶基因工程抗體；⑷基因診斷與基因治療；⑸應(yīng)用基因工程技術(shù)建立新藥的篩選模型；⑹應(yīng)用基因工程技術(shù)改良菌種，產(chǎn)生新的微生物藥物；⑺基因工程技術(shù)在改進藥物生產(chǎn)工藝中的應(yīng)用；⑻利用轉(zhuǎn)基因動、植物生產(chǎn)蛋白質(zhì)類藥物。

40細胞工程制藥包含哪些內(nèi)容？

答：有單克隆抗體技術(shù)、植物細胞培養(yǎng)生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物和動物細胞培養(yǎng)：⑴單克隆抗體技術(shù)，是將能在體外無限繁殖的惡性瘤細胞與能產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細胞融合，使融合細胞具有兩種親本細胞特性的技術(shù)；⑵動物細胞培養(yǎng)，主要用于通過大量的細胞培養(yǎng)獲得細胞產(chǎn)品，同時可用來進行病毒抗原的制備和疫苗的生產(chǎn)；⑶植物細胞培養(yǎng)生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物，利用特殊設(shè)計適于植物細胞培養(yǎng)的發(fā)酵罐，培養(yǎng)經(jīng)過細胞系篩選，條件優(yōu)化的植物細胞，可獲得有經(jīng)濟價值的次生代謝產(chǎn)物。

41微生物工程制藥包含哪些內(nèi)容？

答：微生物工程，即發(fā)酵工程，其內(nèi)容涉及：菌種的培養(yǎng)和選育、菌的代謝與調(diào)節(jié)、培養(yǎng)基滅菌、通氣攪拌、溶氧、發(fā)酵條件的優(yōu)化、發(fā)酵過程各種參數(shù)與動力學(xué)、發(fā)酵反應(yīng)器的設(shè)計和自動控制、產(chǎn)品的分離純化和精制等。

42酶工程制藥包含哪些內(nèi)容？

答：⑴酶的分離、提純、大批量生產(chǎn)及應(yīng)用開發(fā)；⑵酶和細胞的固定化及酶反應(yīng)器的研究（包括酶傳感器、反應(yīng)檢測等）；⑶酶生產(chǎn)中基因工程技術(shù)的應(yīng)用及遺傳修飾酶（突變酶）的研究；⑷酶的分子改造與化學(xué)修飾以及酶的結(jié)構(gòu)與功能之間關(guān)系的研究；⑸有機相中酶反應(yīng)的研究；⑹酶的抑制劑、激活劑的開發(fā)及應(yīng)用研究；⑺抗體酶、核酸酶的研究；⑻模擬酶、合成酶及酶分子的人工設(shè)計、合成研究。

43生物化學(xué)制藥包含哪些內(nèi)容？

答：運用生物化學(xué)研究方法，將生物體中起重要生理生化作用的各種基本物質(zhì)經(jīng)過提取、分離、純化等手段制造出的藥物；或者將上述這些已知藥物加以結(jié)構(gòu)改造或人工合成創(chuàng)造出的自然界沒有的新藥物。主要有氨基酸、多肽蛋白類、核酸類、多糖、脂、細胞生長調(diào)節(jié)因子等。

44生物制藥的下游技術(shù)包含哪些內(nèi)容？

答：

45醫(yī)藥生物制品包含哪些內(nèi)容？

答：

46現(xiàn)代生物藥物已形成哪四大類型

答：一是應(yīng)用重組DNA技術(shù)（包括基因工程技術(shù)、蛋白質(zhì)工程技術(shù)）制造的基因重組多肽、蛋白質(zhì)類治療劑；二是基因藥物，如基因治療劑、基因疫苗、反義藥物和核酶等；三是來自動物、植物和微生物的天然生物藥物；四是合成與部分合成的生物藥物。

47、生物藥物按生理功能和臨床用途可分那幾類：

答：（1）治療藥物：用于常見病、多發(fā)病。

（2）預(yù)防藥物：菌苗、疫苗、類毒素。主要用于傳染病。

（3）診斷藥物：速度快、靈敏度高、特異性強。

（4）其他生物醫(yī)藥用品：生化試劑、保健品、化妝品、食品、醫(yī)用材料。

48.敘述基因工程藥物生產(chǎn)的基本過程

答：獲得目的基因；組建重組質(zhì)粒；構(gòu)建基因工程菌（或細胞）；培養(yǎng)工程菌；產(chǎn)物分離純化；除菌過濾；半成品檢定；成品檢定；包裝。

49.酶工程制藥的基本技術(shù)哪些？簡述酶和細胞固定化方法？

答：基本技術(shù)：酶的固定化與制備技術(shù)、細胞的固定化與制備技術(shù)。

酶和細胞固定化方法：酶和細胞的固定化方法是指通過載體等將酶和細胞限制或固定于特定的空間位置的方法。一般分為載體結(jié)合法、交聯(lián)法、包埋法、和選擇性變性（熱處理）方法：

載體結(jié)合法：是將酶和細胞結(jié)合到不溶性載體上的一種固定化方法，根據(jù)結(jié)合形式的不同，可以分為物理吸附法、離子結(jié)合法和共價結(jié)合法等三種。

交聯(lián)法：是用雙功能或多功能試劑使酶與酶或微生物的細胞與細胞之間交聯(lián)的固定化方法。

包埋法：可分為網(wǎng)格型和微囊型兩種。將酶或細胞包埋在高分子凝膠細微網(wǎng)格中的稱為網(wǎng)格型，將酶或細胞包埋在高分子半透膜中的稱為微囊型。

選擇性熱變性法：專用于細胞固定化，是將細胞在適當溫度下處理使細胞膜蛋白變性但不使酶變性而使酶固定于細胞內(nèi)的方法。

50離體培養(yǎng)的動物細胞分為哪些類型？

答：離體培養(yǎng)細胞分為兩類：貼壁依賴型（貼壁細胞）和貼壁非依賴型（懸浮細胞）。

    貼壁細胞：這類細胞的生長必須有可以貼附的支持物表面，細胞依靠自身分泌的或培養(yǎng)基中提供的貼附因子才能在該表面上生長、增殖。當細胞在該表面生長后，一般形成兩種形態(tài)即成纖維樣細胞型或上皮樣細胞型。

    懸浮細胞：這類細胞的生長不依賴支持物表面，可在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長，如血液內(nèi)的淋巴細胞和用以生產(chǎn)干擾素的Namalwa細胞等，細胞呈圓形。

51、生產(chǎn)用動物細胞有哪些種類？它們各具有什么特點？

答：原代細胞：是直接取自動物組織、器官,經(jīng)過粉碎、消化而獲得的細胞懸液（109/g）。需要大量動物，費錢費勞力。雞胚細胞、原代兔腎細胞、鼠腎細胞、淋巴細胞。

二倍體細胞系：原代細胞經(jīng)過傳代篩選克隆，從多種細胞成分的組織中，挑選并純化出某種具有一定特征的細胞株。它具備“正常”細胞的特點即染色體組型仍是2n的核型；具有明顯的貼壁依賴型和接觸抑制的特性；只有有限的增殖能力，一般可連續(xù)傳代培養(yǎng)50代；無致瘤性。

轉(zhuǎn)化細胞系：通過某個轉(zhuǎn)化過程形成的，常由于染色體斷裂變成異倍體，失去正常細胞特點，而獲得無限增殖能力。轉(zhuǎn)化過程可以是自發(fā)的，和人工的，從腫瘤組織中。

融合細胞系：用人工方法使離體的兩個不同的細胞融合并成一個細胞，從而培養(yǎng)出一系列有其特性的雜種細胞和新的物種。

重組工程細胞系：有以上這些細胞進行融合和重組的工程細胞系。

52常用的培養(yǎng)動物細胞的培養(yǎng)基的種類有哪些？

答：天然培養(yǎng)基：血清、羊水、腹水等作為培養(yǎng)基,成分復(fù)雜、成分不穩(wěn)定，來源有限，不適于大量培養(yǎng)和生產(chǎn)的需要。

合成培養(yǎng)基：其優(yōu)點是成分明確，組分穩(wěn)定，可大量生產(chǎn)，在動物細胞培養(yǎng)中采用最普遍的有BME、MEM、DMEM等。組成大致為氨基酸、維生素、糖類、無機鹽、其它成分（核酸前體如腺苷、鳥苷、胞苷等及一些氧化還原劑如谷胱甘肽等），并添加小牛血清。

無血清培養(yǎng)基：優(yōu)點有：①提高重復(fù)性；②減少微生物污染；③供應(yīng)充足穩(wěn)定；④產(chǎn)品易純化；⑤避免血清因素對細胞的毒性；⑥減少血清中蛋白對生物測定的干擾。無血清培養(yǎng)基加入添加劑：⑴生長因子和激素；⑵結(jié)合蛋白；⑶貼附因子和伸展因子；⑷有利細胞生長的因子和元素。

53、動物細胞生物反應(yīng)器必須具備哪些基本要求？有哪些類型？特點是什么？

答：㈠基本要求：⑴制造生物反應(yīng)器所采用的一切材料，尤其是與培養(yǎng)基、細胞直接接觸的材料，對細胞必須是無毒性的；

⑵生物反應(yīng)器的結(jié)構(gòu)必須使之具有良好的傳質(zhì)、傳熱和混合的性能；

⑶密封性能良好，可避免一切外來的不需要的微生物的污染；

⑷對培養(yǎng)環(huán)境中多種物理化學(xué)參數(shù)能自動檢測和調(diào)節(jié)控制，控制的精確度高，而且能保持環(huán)境質(zhì)量的均一；

⑸可長期連續(xù)運轉(zhuǎn)，這對于培養(yǎng)動物細胞的生物反應(yīng)器顯得尤其重要；

⑹容器加工制造時要求內(nèi)面光滑，無死角，以減少細胞或微生物的沉積；

⑺拆裝、連接和清潔方便，能耐高壓蒸汽消毒，便于操作維修；

⑻設(shè)備成本盡可能低。

    ㈡類型及特點：⑴攪拌罐式生物反應(yīng)器：高徑比（H/D）一般為1-1.5：1，有利于增大液體與空氣的接觸面。罐底成圓形，以避免細胞和載體沉積在周邊。攪拌速度一般為20-100r/min。配備有進出液體系統(tǒng)，以便進行灌流培養(yǎng)。主要用于懸浮細胞的培養(yǎng)、微載體培養(yǎng)、微囊和巨載體培養(yǎng)以及結(jié)團培養(yǎng)；

⑵氣升式生物反應(yīng)器：特點是氣體通過裝在罐底的噴管進入反應(yīng)器的導(dǎo)流管，致使該部液體的密度小于導(dǎo)流管外部的液體密度，而使液體形成循環(huán)流。具有剪切力小，混合均一，氧和營養(yǎng)的傳遞好，有利于設(shè)備密封，降低了造價，高徑比一般為10：1，通氣產(chǎn)生的氣泡直徑為1-2mm。主要用于懸浮細胞的分批式培養(yǎng)；

⑶中空纖維式生物反應(yīng)器：由數(shù)百乃至數(shù)千根中空纖維集束組成?？梢越亓粝鄬Ψ肿淤|(zhì)量為10000、50000或100000的物質(zhì)。該反應(yīng)器可使細胞保持較高的存活性，健康的形態(tài)和核型。其優(yōu)點是占地空間小，產(chǎn)品質(zhì)量、產(chǎn)量高，生產(chǎn)成本低。不足之處是不能重復(fù)使用。不能耐高壓蒸汽滅菌，需用滅菌。難以取樣檢測。適于貼壁細胞和懸浮細胞培養(yǎng)；

⑷透析袋或膜式生物反應(yīng)器：既可用以培養(yǎng)貼壁細胞，也可以用于培養(yǎng)懸浮細胞。其優(yōu)點是既可使細胞達到很高密度，又可隨意組合進行操作，達到保留和濃縮產(chǎn)品或及時分離提純產(chǎn)品的目的；

⑸固定床或流化床式生物反應(yīng)器：其特點是結(jié)構(gòu)比較簡單，裝填的材料可以是一切對細胞無毒、又有利于細胞貼附的材料，也可以是有孔的陶瓷、有孔的玻璃等。既可用于貼壁細胞的附著，又有利于懸浮細胞在纖維間被固定。

54、.生物藥物的分類方法按藥物的化學(xué)本質(zhì)和特性有哪些？

答：(1)氨基酸及其衍生物類藥物；

(2)多肽及蛋白質(zhì)類藥物；

(3)酶與輔酶類藥物；

(4)核酸及其降解物和衍生物類藥物；

(5)糖類藥物；

(6)脂類藥物；

(7)細胞生長因子類；

(8)生物制品類。

56. 抗體診斷藥物的類型有哪些？

答：一、血清學(xué)鑒定用的抗體類試劑：⒈鑒定病原菌的抗體試劑；⒉乙型肝炎病毒表面抗原的反向被動血凝診斷試劑；⒊妊娠診斷試劑；⒋抗ABO血型系統(tǒng)血清。

    二、免疫標記技術(shù)用的抗體類試劑：⒈熒光抗體診斷試劑；⒉免疫酶抗體診斷試劑；⒊放射免疫用抗體診斷試劑。

    三、導(dǎo)向診斷藥物：放射性核素標記抗體；腫瘤放射免疫顯像。

57..體外動物細胞培養(yǎng)的合成培養(yǎng)基的組成大致都有哪些？

答：⑴氨基酸；⑵維生素；⑶糖類；⑷無機鹽；⑸其它成分（核酸前體如腺苷、鳥苷、胞苷等及一些氧化還原劑如谷胱甘肽等）；并添加小牛血清。

58.植物細胞大規(guī)模培養(yǎng)的方法按培養(yǎng)基類型有哪些？

答：分為固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)兩種類型：

 ⑴固體培養(yǎng)：是在培養(yǎng)基中加入一定量的凝固劑，經(jīng)加熱溶解后，分別裝入培養(yǎng)用的容器中，冷卻后凝結(jié)成固體培養(yǎng)基。優(yōu)點：簡便易行、所占空間??；缺點：①外植體或其愈傷組織僅有一部分與培養(yǎng)基相接觸，該部位的營養(yǎng)物質(zhì)可被迅速吸收，從而形成培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的濃度差，并進而導(dǎo)致愈傷組織生長的不平衡；②由于外植體的基部插入固體培養(yǎng)基中，因此該處呈現(xiàn)氣體交換不暢的狀態(tài)，阻礙了組織呼吸作用的正常進行，同時也會堆積生長過程中排出的有害物質(zhì)；③在靜止狀態(tài)下，由于重力作用，以及光線從上部或一側(cè)射人，因而在愈傷組織細胞間出現(xiàn)了極化現(xiàn)象，結(jié)果導(dǎo)致細胞群體的不均勻狀態(tài)；④固體培養(yǎng)物有時需要測定一些生理生化指標(如使用華式呼吸計測量呼吸，或用飼喂放射性核素標記成分來追蹤細胞內(nèi)的物質(zhì)代謝變化)。

⑵液體培養(yǎng)系統(tǒng)：包括小規(guī)模的懸浮培養(yǎng)和大規(guī)模的成批培養(yǎng)、半連續(xù)和連續(xù)培養(yǎng)。懸浮培養(yǎng)可分為靜止和振蕩兩類。靜止液體培養(yǎng)和固體培養(yǎng)一樣，也具有簡便易行的特點，而且培養(yǎng)基還不會出現(xiàn)營養(yǎng)物質(zhì)濃度差的現(xiàn)象。振蕩液體培養(yǎng)，是使懸浮細胞在液體培養(yǎng)基中，并不斷振(轉(zhuǎn))動下進行培養(yǎng)。

59. 生物技術(shù)所含的主要技術(shù)范疇有哪些？

答：基因工程、細胞工程、酶工程、發(fā)酵工程、生化工程、蛋白質(zhì)工程、抗體工程等。

60什么是微生物工程制藥？包括哪些內(nèi)容？主要討論什么？

答：

61. 動物細胞中的基因表達的特點有哪些？

答：細胞生長慢，生產(chǎn)率低；條件刻苛，費用高；培養(yǎng)液濃度較小；表達的外源細胞均為傳代細胞；表達產(chǎn)物是否致癌尚有疑問。

62、抗體治療藥物有哪些？

答：一、放射性核素標記的抗體治療藥物：抗體作為放射性核素的導(dǎo)向載體，標記操作簡便用量小。放射性核素標記的抗體對腫瘤細胞殺傷較大。

    二、抗癌藥物偶聯(lián)的抗體藥物：①常用的抗癌藥物：氨甲喋呤（MTX）、阿霉素（ADM）、絲裂霉素（MMC）等。以人血漿白蛋白作為中間載體，可明顯提高每分子抗體所攜帶的MTX量，使體外細胞毒性體高二倍；②抗體類藥物逆轉(zhuǎn)耐藥性：腫瘤細胞對抗原藥物可產(chǎn)生多藥耐藥性（MDR）。MDR是由基因調(diào)控的，其編碼蛋白稱為P糖蛋白，其中P170是與腫瘤耐藥相關(guān)的主要蛋白，由Mdr1基因編碼，1280氨基酸殘基，分子量170K。

63、發(fā)酵工程的研究內(nèi)容包括哪些？

答：發(fā)酵工程內(nèi)容涉及:菌種的培養(yǎng)和選育、菌的代謝與調(diào)節(jié)、培養(yǎng)基滅菌、通氣攪拌、溶氧、發(fā)酵條件的優(yōu)化、發(fā)酵過程各種參數(shù)與動力學(xué)、發(fā)酵反應(yīng)器的設(shè)計和自動控制、產(chǎn)品的分離純化和精制等。

64微生物菌種誘變使用的主要誘變劑有哪些？它們的誘變機制是什么？

答：主要誘變劑：物理誘變劑、化學(xué)誘變劑和生物誘變劑。

    物理誘變劑：⑴紫外線：波長為200-300nm的紫外線具有誘變作用，可引起DNA鏈的斷裂、DNA分子內(nèi)和分子間的交聯(lián)、核酸與蛋白質(zhì)交聯(lián)，主要是胸腺嘧啶二聚體的形成。

                ⑵X射線、γ射線、快中子等：X射線和γ射線是由一個個光子組成的光子流。光子只有與原子或分子直接碰撞時，把全部或部分能量傳遞給原子而產(chǎn)生次級電子，這種次級電子一般具有很高的能量，能產(chǎn)生電離作用而引起微生物變異?？熘凶拥纳飳W(xué)效應(yīng)和X射線相同，但由于快中子有更大的電離密度，因而更能夠引起基因突變和染色體畸變，特別是正突變效率高。

    化學(xué)誘變劑：⑴第一類：亞硝酸、硫酸二乙酯、甲基磺酸乙酯等是與一個或多個核酸堿基起化學(xué)變化，引起DNA復(fù)制時堿基配對的轉(zhuǎn)換而導(dǎo)致變異。

⑵第二類：5-溴尿嘧啶、5-氨基尿嘧啶等與天然堿基十分接近的類似物摻入到DNA分子中而引起變異。

⑶第三類：是DNA分子上減少或增加一兩個堿基引起堿基突變點以下全部遺傳密碼轉(zhuǎn)錄和翻譯的錯誤，如吖啶類物質(zhì)。

    生物誘變劑：噬菌體。

65微生物發(fā)酵主要有哪些方式？各具有什么特點？

答：主要方式：分批發(fā)酵、補料分批發(fā)酵和連續(xù)發(fā)酵。

    分批發(fā)酵：是將全部物料一次投入到反應(yīng)器中，經(jīng)滅菌，接種，經(jīng)過若干時間的發(fā)酵后再將發(fā)酵液一次放出的操作過程。放料后再重復(fù)投料、滅菌、接種、發(fā)酵過程。它以微生物生長、各種基質(zhì)消耗和代謝產(chǎn)物合成都處于瞬變之中為特征，整個發(fā)酵過程處于不穩(wěn)定狀態(tài)。

    補料分批發(fā)酵：是將種子接入發(fā)酵反應(yīng)器中進行培養(yǎng)，經(jīng)過一段時間后，間歇或連續(xù)地補加新鮮培養(yǎng)基，使菌體進一步生長的培養(yǎng)方法。所補材料可為全料（基礎(chǔ)培養(yǎng)基）或簡單的碳源、氮源及前體等。

    連續(xù)發(fā)酵：是將種子接入發(fā)酵反應(yīng)器中，攪拌培養(yǎng)至一定菌體濃度后，開動進料和出料的蠕動泵，以控制一定稀釋率進行不間斷的培養(yǎng)，發(fā)酵反應(yīng)器中的細胞總數(shù)和總體積均保持不變，發(fā)酵體系處于平衡狀態(tài)，發(fā)酵中的各個變量都能達到恒定值而區(qū)別于瞬間狀態(tài)的分批發(fā)酵。

66影響發(fā)酵的主要因素有哪些？如何對發(fā)酵過程進行控制？

答：主要因素有：培養(yǎng)基的成分和配比、溫度影響酶和發(fā)酵液的物理性質(zhì)、溶氧和pH的影響。

㈠培養(yǎng)基：用于維持細胞生長的營養(yǎng)基質(zhì)。不同的微生物對營養(yǎng)要求有很大的差異，培養(yǎng)基的成分和配比合適與否，對產(chǎn)生菌的生長發(fā)育、發(fā)酵單位的增長有相當大的影響，同時還影響提取工藝及產(chǎn)品質(zhì)量。速效碳源、氮源有利于菌體生長，遲效碳源、氮源有利于延長代謝產(chǎn)物的合成，因此選擇最適碳源、氮源對提高代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量是很重要的。                                                                                 ㈡溫度：在發(fā)酵過程中，菌體生長和產(chǎn)物合成與溫度有密切關(guān)系，最適發(fā)酵溫度是既適合菌體的生長、又適合代謝產(chǎn)物合成的溫度，但最適生長溫度與最適生產(chǎn)溫度往往是不一致的。最適發(fā)酵溫度還隨菌種、培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)條件和菌體生長階段而改變。在理論上，整個發(fā)酵過程中不應(yīng)只有一個培養(yǎng)溫度，而應(yīng)該根據(jù)發(fā)酵的不同階段，選擇不同的培養(yǎng)溫度。在生長階段，應(yīng)選擇最適生長溫度；在產(chǎn)物分泌階段，應(yīng)選擇最適生產(chǎn)溫度。這樣的變溫發(fā)酵所得產(chǎn)物的產(chǎn)量是比較理想的。

㈢溶氧：發(fā)酵液的溶氧濃度是由供氧和需氧兩方面所決定的。在供氧方面，主要是設(shè)法提高氧傳遞的推動力和液相體積氧傳遞系數(shù)的值。提高溶氧濃度，如調(diào)節(jié)攪拌轉(zhuǎn)速或通氣速率來控制供氧。發(fā)酵液的需氧量受菌體濃度、基質(zhì)的種類和濃度以及培養(yǎng)條件等因素的影響。其中以菌濃的影響最為明顯?？刂坪米钸m溶氧濃度。最適菌濃既能保證產(chǎn)物的比生產(chǎn)速率維持在最大值，又不會使需氧大于供氧。通過控制基質(zhì)的濃度來實現(xiàn)控制最適溶氧濃度。除控制補料速度外，在工業(yè)上，還可采用調(diào)節(jié)溫度，液化培養(yǎng)基、中間補水、添加表面活性劑等措施，來改善溶氧水平。

㈣pH：在了解發(fā)酵過程中最適pH的要求之后，就要采用各種方法來控制。首先需要考慮和試驗發(fā)酵培養(yǎng)基的基礎(chǔ)配方，使它們有個適當?shù)呐浔龋拱l(fā)酵過程中的pH變化在合適的范圍內(nèi)。通過在發(fā)酵過程中直接加酸或堿和補料的方式來控制，特別是補料的方法，效果比較明顯。當發(fā)酵的pH和氨氮含量都低時，補加氨水，就可達到調(diào)節(jié)pH和補充氨氮的目的，反之，pH較高，氨氮含量又低時，補加硫酸氨。

67、如何克隆抗生素生物合成基因？

答：㈠在標準宿主系統(tǒng)中克隆檢測單基因產(chǎn)物：如果有單酶基因表達產(chǎn)物的檢測方法，可以利用鳥槍克隆法，把抗生素產(chǎn)生菌的DNA克隆到最常用的宿主變青鏈霉菌中，通過檢測宿主菌中的個別基因產(chǎn)物，篩選克隆，從而分離到相應(yīng)的基因。

㈡阻斷變株法：是通過一系列阻斷變株的互補結(jié)果來確定被克隆DNA片段的性質(zhì)。首先經(jīng)誘變獲得一系列生物合成阻斷變株，用互補共合成法來確定這些變株在生物合成途徑中的相互位置。從野生型菌株中分離DNA，與載體連接后轉(zhuǎn)入阻斷變株，以抗生素表型的恢復(fù)作指標，克隆生物合成不同階段的酶基因。

㈢突變克隆法：是指利用整合質(zhì)?；蚴删w，將原株DNA轉(zhuǎn)入到抗生素產(chǎn)生菌中。由于基因有同源性，有可能發(fā)生基因重組，一旦某DNA片段的插入干擾了原株某個生物合成基因的轉(zhuǎn)錄，即得到這個生物合成基因的阻斷突變株，其相應(yīng)的DNA片段就是這個階段的生物合成基因。

㈣直接克隆法：由于抗生素生物合成基因往往成簇存在，使得有可能克隆整套生物合成基因。這種方法主要用于基因簇相對較小的抗生素生物合成基因。

㈤克隆抗生素抗性基因法：一般抗性基因只有1-2 kb，較易檢測和克隆。所以先將抗性基因克隆到標準宿主或產(chǎn)生菌的敏感突變株中，再分析與之緊密連鎖的DNA，就可能找到生物合成基因。也可以利用已克隆的抗性基因作為探針，從產(chǎn)生菌基因文庫中分離與之同源并帶有生物合成基因的DNA片段。這是一種比較簡便可行的克隆策略，克隆的目的性大大加強，其中關(guān)鍵是需要有對所要克隆的抗生素敏感的受體菌。

㈥寡核苷酸探針法：有些抗生素生物合成酶被分離純化后，就可能獲得這些酶的部分氨基酸序列。根據(jù)氨基酸序列推導(dǎo)設(shè)計出較低程度簡并性的基因序列，人工合成寡核苷酸并作為探針，就可以從基因文庫中克隆生物合成基因。

㈦同源基因雜交法：利用一種已克隆的抗生素生物合成基因片段為探針，探測相關(guān)抗生素同源基因，最后分離及克隆抗生素生物合成基因。由于基因保守序列的同源性，利用同源基因雜交法克隆化學(xué)結(jié)構(gòu)類似的抗生素生物合成基因是比較快速準確的方法。

68、基因工程在抗生素生產(chǎn)中有哪些應(yīng)用？

答：㈠提高抗生素的產(chǎn)量：利用基因工程技術(shù)有目的地定向改造基因，提高基因的表達水平以改造菌種的生產(chǎn)能力：①增加參與生物合成限速階段基因的拷貝數(shù)；②通過調(diào)節(jié)基因的作用可增加或降低抗生素的產(chǎn)量；③增加抗性基因，抗性基因不但通過它的產(chǎn)物滅活胞內(nèi)或胞外的抗生素，保護自身免受所產(chǎn)生的抗生素的殺死作用，有些抗性基因的產(chǎn)物還直接參與抗生素的合成。

㈡改善抗生素組分：應(yīng)用基因工程方法可以定向地改造抗生素產(chǎn)生菌，獲得只產(chǎn)生有效組分的菌種。

㈢改進抗生素生產(chǎn)工藝：利用重組DNA技術(shù)克隆血紅蛋白基因到抗生素產(chǎn)生菌中，在細胞中表達血紅蛋白，可望從提高細胞自身代謝功能入手解決溶氧供求矛盾，提高氧的利用率，具有良好的應(yīng)用前景。

㈣產(chǎn)生雜合抗生素：應(yīng)用基因工程技術(shù)改造菌種產(chǎn)生新的雜合抗生素（通過遺傳重組技術(shù)產(chǎn)生的新的抗菌活性化合物）：①生物合成途徑中某個酶基因的突變；②在生物合成途徑中引入一個酶基因；③利用底物特異性不強的酶催化形成新產(chǎn)物。

㈤組合生物合成：是在微生物次級代謝產(chǎn)物生物合成基因和酶學(xué)研究基礎(chǔ)上形成的。由于微生物次級代謝產(chǎn)物生物合成是由多酶體系參與的，這些多酶體系中的各個酶系是由單個分開的具有明顯的功能區(qū)域所組成，并按照一定的組織結(jié)構(gòu)協(xié)調(diào)起作用。其特點是：①通過多個催化功能的組合完成復(fù)雜化合物的合成；②合成的化合物為天然產(chǎn)物及其衍生物；③適用于化學(xué)合成困難的復(fù)雜化合物。

3什么是基因藥物？

 

基因藥物：是以基因物質(zhì)（RNA或DNA及其衍生物）作為治療的物質(zhì)基礎(chǔ)，包括基因治療用的重組目的DNA片段、重組疫苗、反義藥物和核酶等

7什么是滅活疫苗？

滅活疫苗：用物理或化學(xué)方法將病原菌殺死,使之失去毒力,但仍保留其免疫原性的疫苗。

22生物技術(shù)藥物分為哪些類型？（和46題相同）

答：一是應(yīng)用重組DNA技術(shù)（包括基因工程技術(shù)、蛋白質(zhì)工程技術(shù)）制造的基因重組多肽、蛋白質(zhì)類治療劑；二是基因藥物，如基因治療劑、基因疫苗、反義藥物和核酶等；三是來自動物、植物和微生物的天然生物藥物；四是合成與部分合成的生物藥物。

27酶類藥物的生產(chǎn)方法有哪些？

答：生物提取、微生物發(fā)酵法與細胞培養(yǎng)、酶的化學(xué)合成。

 

37蛋白質(zhì)工程制藥包含哪些內(nèi)容？

答：以蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系為基礎(chǔ)，通過控制修飾和基因合成，對現(xiàn)有蛋白質(zhì)加以定向改造、設(shè)計、構(gòu)建，最終獲得天然蛋白質(zhì)，甚至較天然蛋白質(zhì)更優(yōu)良、更符合人類需要的蛋白質(zhì)藥物。內(nèi)容有對蛋白質(zhì)和多肽類藥物的分類、分子設(shè)計與合成、結(jié)構(gòu)測定和應(yīng)用。

41微生物工程制藥包含哪些內(nèi)容？

答：微生物工程，即發(fā)酵工程，其內(nèi)容涉及：菌種的培養(yǎng)和選育、菌的代謝與調(diào)節(jié)、培養(yǎng)基滅菌、通氣攪拌、溶氧、發(fā)酵條件的優(yōu)化、發(fā)酵過程各種參數(shù)與動力學(xué)、發(fā)酵反應(yīng)器的設(shè)計和自動控制、產(chǎn)品的分離純化和精制等。

44生物制藥的下游技術(shù)包含哪些內(nèi)容？

答：預(yù)處理及固液分離技術(shù)；發(fā)酵液預(yù)處理；細胞破碎；固液分離；沉淀；溶劑萃取和生物藥物的色譜分離法。

45醫(yī)藥生物制品包含哪些內(nèi)容？

答：醫(yī)藥生物制品是應(yīng)用普通的或以基因工程、細胞工程、蛋白質(zhì)工程、發(fā)酵工程等生物技術(shù)獲得的微生物、細胞的各種動物和人源的組織和液體等生物材料制備，用于人類疾病預(yù)防、治療和診斷的藥品。包括：①疫苗，包括細菌類疫苗（含類毒素）、病毒性疫苗；②抗毒素與免疫血清；③血液制品；④細胞因子與DNA重組產(chǎn)品；⑤體內(nèi)及體外免疫診斷制品；⑥其它制品，包括毒素抗原、變態(tài)反應(yīng)原等。

49.酶工程制藥的基本技術(shù)哪些？簡述酶和細胞固定化方法？

答：基本技術(shù)：酶和細胞的固定化技術(shù)；酶的化學(xué)修飾技術(shù)；酶法的手性藥物合成技術(shù)。

60什么是微生物工程制藥？包括哪些內(nèi)容？主要討論什么？

答：微生物制藥是利用微生物進行藥物研究、生產(chǎn)和制劑的綜合應(yīng)用技術(shù)科學(xué)。包括微生物藥用菌的選育、發(fā)酵、產(chǎn)物的分離和純化工藝等。討論各種藥物發(fā)酵的微生物來源和改造、微生物藥物的生物合成和調(diào)控機制、發(fā)酵工藝與主要參數(shù)的決定、發(fā)酵過程的優(yōu)化控制、質(zhì)量控制等。

30現(xiàn)代生物技術(shù)制藥及現(xiàn)代生物技術(shù)具體包括哪些內(nèi)容？

答：現(xiàn)代生物技術(shù)制藥：包括現(xiàn)代生物制藥技術(shù)的基礎(chǔ)理論和基本技術(shù)。對不同來源的藥物資源或原料（包括動物、植物、微生物和海洋生物），從化學(xué)結(jié)構(gòu)或組分、性質(zhì)、操作技術(shù)、技術(shù)路線、工藝過程等進行論述。介紹各種工藝過程和工藝路線。

現(xiàn)代生物技術(shù)包括：⑴重組DNA技術(shù)；

⑵細胞和原生質(zhì)體融合技術(shù)；

⑶酶和細胞的固定化技術(shù)；

⑷植物脫毒和快速繁殖技術(shù)；

⑸動物和植物細胞的大量培養(yǎng)技術(shù)；

⑹動物胚胎工程技術(shù)；

⑺現(xiàn)代微生物發(fā)酵技術(shù)；

⑻現(xiàn)代生物反應(yīng)工程和分離工程技術(shù)；

⑼蛋白質(zhì)工程技術(shù)；

⑽海洋生物技術(shù)。

31控制基因工程菌的發(fā)酵工藝的目的及主要內(nèi)容是什么?各有什么影響？

答：一、目的是為了使外源基因大量表達，盡可能減少宿主細胞本身蛋白的污染，外源基因的高效表達，不僅涉及宿主、載體和克隆基因之間的相互關(guān)系，而且也與其所處的環(huán)境密切相關(guān)。不同的發(fā)酵條件，代謝途徑也不相同，對下游的純化工藝就會造成不同的影響。

    二、影響：

⑴培養(yǎng)基的影響：培養(yǎng)基的組成既要提高工程菌的生長速率，又要保持工程菌的穩(wěn)定性，使外源基因高效表達。不同的碳源對菌體的生長和外源基因表達有較大的影響。使用葡萄糖和甘油對菌體比生長速率及呼吸強度相差不大。但使用甘油菌體得率較大，而使用葡萄糖菌體產(chǎn)生的副產(chǎn)品較多。在氮源中，酪蛋白水解物有利于產(chǎn)物的合成與分泌。無機磷在許多代謝反應(yīng)中是一個效應(yīng)因子，磷濃度不同，影響菌體生長。低磷濃度下，盡管最大菌濃較低，但產(chǎn)物產(chǎn)率和產(chǎn)物濃度都較高。啟動子只有在低磷酸鹽時才被啟動。

⑵接種量的影響：接種量的大小影響發(fā)酵的產(chǎn)量和發(fā)酵周期。接種量小，菌體延遲期較長，使菌齡老化，不利于外源基因表達。接種量大，可縮短生長延遲期，菌體迅速繁衍，很快進入對數(shù)生長期，適于表達外源基因。接種量過高，使菌體生長過快，代謝物積累過多，反而會抑制后期菌體的生長。

⑶溫度影響：溫度對基因表達的調(diào)控作用可發(fā)生在復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯、或小分子調(diào)節(jié)分子的合成上。復(fù)制，可通過控制復(fù)制來改變基因拷貝數(shù)，影響表達；轉(zhuǎn)錄，可通過影響RNA聚合酶的作用或修飾RNA聚合酶，來調(diào)控基因表達。酶促反應(yīng)。

⑷溶解氧的影響：菌體在大量擴增過程中，進行耗氧的氧化分解代謝，采用調(diào)節(jié)攪拌轉(zhuǎn)速的方法可以改善培養(yǎng)過程中的氧供給，提高活菌產(chǎn)量。在發(fā)酵前期采用較低轉(zhuǎn)速，即可滿足菌體生長，在培養(yǎng)后期，提高攪拌轉(zhuǎn)速才能滿足菌體繼續(xù)生長的要求。這樣既節(jié)約能源又可滿足各個不同階段菌體生長的要求。

⑸誘導(dǎo)時機的影響：一般在對數(shù)生長期或?qū)?shù)生長期后期升溫誘導(dǎo)表達，對數(shù)生長期，細胞快速繁殖，直到細胞密度達到109個每毫升為止，這時菌群數(shù)目倍增，對營養(yǎng)和氧的需求量急增，營養(yǎng)和氧成了菌群旺盛代謝的限制因素。

⑹pH的影響：兩階段培養(yǎng)工藝，培養(yǎng)前期著重于優(yōu)化工程菌的最佳生長條件，培養(yǎng)后期著重于優(yōu)化外源基因的表達，生長最佳期pH6.8～7.4左右，外源蛋白表達時pH為6.0～6.5。

32基因工程藥物制造的主要程序有哪些？

答：⑴目的基因的克??；

⑵構(gòu)建DAN重組體；

⑶DAN重組體轉(zhuǎn)入宿主菌；

⑷構(gòu)建工程菌；

⑸工程菌發(fā)酵；

⑹表達產(chǎn)物的分離純化；

⑺除菌過濾；

⑻半成品檢定；

⑼成品檢定；

⑽包裝。

36簡述制備單克隆抗體的基本步驟。

答：一、抗原與動物免疫：制備特定抗原的單克隆抗體，首先要制備用于免疫的適當抗原，再用抗原進行動物免疫；

二、細胞融合與雜交瘤細胞的選擇性培養(yǎng)；

三、篩選陽性克隆與克隆化：篩選陽性克隆常用檢測方法有免疫酶技術(shù)、免疫熒光技術(shù)、放射免疫技術(shù)等。

四、雜交瘤細胞與抗體性狀的鑒定：雜交瘤細胞鑒定：染色體分析。它是鑒定的客觀指標，了解分泌抗體的能力。

五、單克隆抗體的大量制備：體外培養(yǎng)法可獲的10μg/ml抗體

        體內(nèi)誘生法可獲的5～20mg/ml抗體

六、單克隆抗體的純化：依單抗IgG類和亞類不同，選各種不同的純化方法。

37蛋白質(zhì)工程制藥包含哪些內(nèi)容？

答：以蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系為基礎(chǔ)，通過控制修飾和基因合成，對現(xiàn)有蛋白質(zhì)加以定向改造、設(shè)計、構(gòu)建，最終獲得天然蛋白質(zhì)，甚至較天然蛋白質(zhì)更優(yōu)良、更符合人類需要的蛋白質(zhì)藥物。內(nèi)容有對蛋白質(zhì)和多肽類藥物的分類、分子設(shè)計與合成、結(jié)構(gòu)測定和應(yīng)用。

41微生物工程制藥包含哪些內(nèi)容？

答：微生物工程，即發(fā)酵工程，其內(nèi)容涉及：菌種的培養(yǎng)和選育、菌的代謝與調(diào)節(jié)、培養(yǎng)基滅菌、通氣攪拌、溶氧、發(fā)酵條件的優(yōu)化、發(fā)酵過程各種參數(shù)與動力學(xué)、發(fā)酵反應(yīng)器的設(shè)計和自動控制、產(chǎn)品的分離純化和精制等。

49.酶工程制藥的基本技術(shù)哪些？簡述酶和細胞固定化方法？

答：基本技術(shù)：酶和細胞的固定化技術(shù)；酶的化學(xué)修飾技術(shù)；酶法的手性藥物合成技術(shù)。

酶和細胞固定化方法：酶和細胞的固定化方法是指通過載體等將酶和細胞限制或固定于特定的空間位置的方法。一般分為載體結(jié)合法、交聯(lián)法、包埋法、和選擇性變性（熱處理）方法：

載體結(jié)合法：是將酶和細胞結(jié)合到不溶性載體上的一種固定化方法，根據(jù)結(jié)合形式的不同，可以分為物理吸附法、離子結(jié)合法和共價結(jié)合法等三種。

交聯(lián)法：是用雙功能或多功能試劑使酶與酶或微生物的細胞與細胞之間交聯(lián)的固定化方法。

包埋法：可分為網(wǎng)格型和微囊型兩種。將酶或細胞包埋在高分子凝膠細微網(wǎng)格中的稱為網(wǎng)格型，將酶或細胞包埋在高分子半透膜中的稱為微囊型。

選擇性熱變性法：專用于細胞固定化，是將細胞在適當溫度下處理使細胞膜蛋白變性但不使酶變性而使酶固定于細胞內(nèi)的方法。

61. 動物細胞中的基因表達的特點有哪些？

答：細胞生長慢，生產(chǎn)率低；條件刻苛，費用高；培養(yǎng)液濃度較小；表達的外源細胞均為傳代細胞；表達產(chǎn)物是否致癌尚有疑問。