【摘要】： 本項(xiàng)研究以動(dòng)物微生態(tài)學(xué)的理論方法為指導(dǎo)，研究開(kāi)發(fā)了主要用于禽的復(fù)合菌種的動(dòng)物微生態(tài)制劑—促生靈；并以促生靈菌液為研究材料，對(duì)益生菌制劑對(duì)雛雞的免疫學(xué)影響進(jìn)行了系統(tǒng)動(dòng)態(tài)的研究。結(jié)果如下。 1 促生靈菌液的研制 1．1 用厭氧培養(yǎng)方法從健康成年母雞的直腸內(nèi)容物中分離5株桿菌、4株鏈球菌，經(jīng)細(xì)菌生長(zhǎng)特性、形態(tài)觀察、生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)鑒定所獲得的5株桿菌為乳酸桿菌；4株鏈球菌為2株乳酸糞鏈球菌和2株尿鏈球菌。根據(jù)培養(yǎng)特性和動(dòng)物安全性試驗(yàn)選擇其中的2株乳酸桿菌(LB1、LB2)、1株乳酸糞鏈球菌(SB1)作為益生菌制劑的生產(chǎn)目標(biāo)菌種。 1．2 對(duì)目標(biāo)菌的某些生物學(xué)特性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，菌株LB1、LB2、SB1對(duì)酸有一定的耐受性；對(duì)膽汁能夠耐受且適應(yīng)生長(zhǎng)；在其繁殖生長(zhǎng)過(guò)程中能夠產(chǎn)酸；對(duì)大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、金黃葡萄球菌等均有不同程度的抑制作用。 1．3 研制出適合工廠規(guī)模生產(chǎn)的成本低廉的發(fā)酵培養(yǎng)基和生產(chǎn)工藝流程，為工廠化生產(chǎn)提供了技術(shù)保證。 1．4 對(duì)生產(chǎn)的促生靈菌液常溫避光保存不同時(shí)間細(xì)菌存活數(shù)量進(jìn)行檢測(cè)，確定促生靈菌液的有效保存期為一年。 2 益生菌制劑對(duì)雛雞免疫學(xué)影響和機(jī)理的研究 本項(xiàng)研究采用免疫組織化學(xué)、免疫酶方法、間接ELISA方法、MTT方法，首次對(duì)服用益生菌制劑雛雞和對(duì)照雛雞的免疫學(xué)變化指標(biāo)進(jìn)行了全面系統(tǒng)動(dòng)態(tài)的檢測(cè)，包括：外周血液的T細(xì)胞、B細(xì)胞數(shù)量和IgG、IgM、IgA含量，以及T、B淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)；中樞免疫器官胸腺和法氏囊、外周免疫器官脾臟T_(ANAE+)細(xì)胞、IgC、IgM、IgA抗體生成細(xì)胞數(shù)量；T、B淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)及胸腺、脾臟的IL-2誘生活性；呼吸道和消化道局部粘膜免疫組織哈德?tīng)栂?、十二指腸派伊爾氏結(jié)和盲腸扁桃體的T_(ANAE+)細(xì)胞、IgG、IgM、IgA抗體生成細(xì)胞數(shù)量和淚液、氣管液、腸液、膽汁的IgA、IgM、IgG含量的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律。旨在深入系統(tǒng)地揭示益生菌的免疫增強(qiáng)作用及其機(jī)理。為益生菌的合理開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供重要的科學(xué)依據(jù)。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)： 2．1 1日齡雛雞應(yīng)用益生菌后，外周血液的B細(xì)胞數(shù)量、IgG、IgM、IgA含量，均較對(duì)照雛雞不同程度明顯增加；雛雞外周血液中B細(xì)胞增殖反應(yīng)分別于飼喂后7～18天顯著高于相應(yīng)對(duì)照雛雞。表明雛雞應(yīng)用益生菌后，外周血液的體液免疫功能明顯提高。 2．2 1日齡雛雞應(yīng)用益生菌后，血液中T細(xì)胞數(shù)量和T細(xì)胞增殖反應(yīng)于4～10天較對(duì)照組明顯增高；表明雛雞應(yīng)用益生菌后，外周血液的細(xì)胞免疫功能也明顯提高。 2．3 1日齡雛雞應(yīng)用益生菌后，法氏囊和脾臟的IgG、IgM、IgA抗體生成細(xì)胞數(shù)量均較 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文 中文摘要 對(duì)照雛雞不同程度增加，表明雛雞應(yīng)用益生菌后，促進(jìn)了免疫器官免疫發(fā)育，免疫器官的體液 免疫功能明顯提高。 2.41日齡雛雞應(yīng)用益生菌后，胸腺、法氏囊和脾臟的T細(xì)胞數(shù)量較對(duì)照雛雞明顯升高; 表明雛雞應(yīng)用益生菌后，促進(jìn)了免疫器官免疫發(fā)育，免疫器官的細(xì)胞免疫功能明顯提高。 2.5首次檢測(cè)了服用益生菌制劑雛雞胸腺和脾臟T細(xì)胞IL一2誘生活性變化，揭示了益生 菌對(duì)雛雞細(xì)胞因子的影響規(guī)律，探討了細(xì)胞因子IL一2在益生菌制劑對(duì)雛雞免疫影響中的調(diào)節(jié)作 用;結(jié)果表明，l日齡雛雞飼喂益生菌制劑后，其胸腺和脾臟T細(xì)胞IL一2誘生活性顯著高于對(duì) 照雛雞，表明服用益生菌制劑雛雞細(xì)胞因子的免疫調(diào)節(jié)功能增強(qiáng)。提示IL一2在益生菌制劑促進(jìn) 雛雞免疫發(fā)育成熟中起重要調(diào)節(jié)作用。 2.6首次對(duì)服用益生菌制劑雛雞胸腺和脾臟T細(xì)胞對(duì)ConA增殖反應(yīng)進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果表 明1日齡雛雞飼喂益生菌制劑后，胸腺和脾臟T細(xì)胞對(duì)ConA增殖反應(yīng)明顯高于對(duì)照雛雞，表 明雛雞應(yīng)用益生菌制劑后，其細(xì)胞免疫中樞胸腺、外周免疫效應(yīng)器官脾臟T淋巴細(xì)胞的細(xì)胞免 疫功能均明顯增強(qiáng)。 2.7對(duì)服用益生菌制劑雛雞法氏囊和脾臟B細(xì)胞對(duì)PMA增殖反應(yīng)進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果顯示， 1日齡雛雞飼喂益生菌制劑后，法氏囊及脾臟B淋巴細(xì)胞對(duì)PMA增殖反應(yīng)顯著高于對(duì)照雛雞。 表明雛雞應(yīng)用益生菌制劑后，其體液免疫中樞法氏囊、外周免疫效應(yīng)器官脾臟B淋巴細(xì)胞功能 均明顯增強(qiáng)。 2.81日齡雛雞飼喂益生菌制劑后，其胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)不同程度地高于 相應(yīng)對(duì)照雛雞，表明雛雞服用益生菌制劑后，促進(jìn)了免疫器官胸腺、脾臟和法氏囊的發(fā)育成熟。 2.91日齡雛雞應(yīng)用益生菌后，消化道和呼吸道局部體液—淚液、氣管液、腸液和 膽汁的IgA、IgM、lgG含量在4一7天明顯高于未服用益生菌雛雞;局部勃膜免疫組織一 哈德?tīng)栂?、盲腸扁桃體和十二指腸派伊爾結(jié)的IgA、IgM、IgG生成細(xì)胞和T細(xì)胞數(shù)量在 1一10天明顯高于未服用益生菌雛雞。表明雛雞應(yīng)用益生菌后，促進(jìn)了勃膜免疫組織的發(fā)育， 消化道、呼吸道局部豁膜的細(xì)胞免疫和體液免疫功能明顯提高。 本項(xiàng)研究首次從禽的局部體液免疫球蛋白含量變化、局部組織抗體生成細(xì)胞和T細(xì)胞數(shù)量 變化揭示益生菌的作用機(jī)理，為益生菌的開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供了科學(xué)的依據(jù)，具有重要的理論和實(shí)踐 意義。

【關(guān)鍵詞】：益生菌制劑 復(fù)合菌種 雛雞 免疫機(jī)理
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2004