【求助】己酸菌的篩選與培養(yǎng)條件及方法

雨霧山莊 2012-10-27

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己酸菌是一種厭氧菌，在白酒窖池中比較多，而且是濃香型白酒產(chǎn)香的主要菌種，有做過這方面研究的朋友嗎？我是新手上路，大家多指教～ Smile

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2007-11-24 13:53消息引用收藏

分離培養(yǎng)己酸菌所使用的培養(yǎng)基
1．培養(yǎng)基；
種子培養(yǎng)基：
乙酸鈉 0.5％．
硫酸銨 0.05％，
硫酸鎂 0.02％，
磷酸氫二鉀0.04％，
酵母膏 0.1％，
乙醇 2％(殺菌后，接種前加入)，
碳酸鈣 1％(稍后加)，
水 100％。
發(fā)酵培養(yǎng)基：
有如下幾種：
①同種子培養(yǎng)基。此法質(zhì)量較好，不易污染，但成本較高。
②液態(tài)法白酒
發(fā)酵糟水40—50％，
醋酸鈉0.3％，
碳酸鈣0.5％．
pH(用石灰乳中和)6.5—7.0，
酒精2％(稍后加)。
③固態(tài)法白酒酒糟20％，用水浸泡后。用石灰乳調(diào)至pH值6.5—7.0，煮沸，加2％酒精。
④固態(tài)法白酒發(fā)酵淋漿水，用石灰乳調(diào)pH值至6.5—7.0加水4倍，煮沸，冷后加酒精2％。

2.培養(yǎng)步驟：

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2007-11-24 13:56消息引用收藏

注意事項：
①為保證厭氣條件，各代培養(yǎng)基必須裝滿容器，高液面培養(yǎng)，并用乙醇封口。瓶口可采用塑料布包封。

②只要不發(fā)生污染，生產(chǎn)中不必每代都從砂土管接種，可從中間擴大分割，如用卡氏罐、三角瓶，進行分割循環(huán),即將大部分清液移至下代后，在瓶底殘留物中，注入新培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)使用。

③己酸菌培養(yǎng)易發(fā)生氨細菌污染，使發(fā)酵液發(fā)黑、惡臭，己酸產(chǎn)量大幅度下降。為了避免這種情況，各代培養(yǎng)必須嚴(yán)格操作，保證必要的衛(wèi)生和無菌條件。同時應(yīng)適當(dāng)加大接種量，比如可加大接種量至10—20％。

④生長良好的已酸菌，可在培養(yǎng)液中見到較好的分層，并有己酸特有的清新氣味。產(chǎn)生細小的氣泡(H2)，表面不形成浮膜。

參考資料：http://www./fread.php?id=5660
希望有幫助！

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2007-11-26 20:40消息引用收藏

謝謝樓上的指導(dǎo)，在以后的實驗中遇到的問題希望還可以得到你的指點，真的非常感謝！

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2007-11-26 21:57消息引用收藏

己酸菌[18]
1968年貝強普氏(Bachamp`s)首先發(fā)現(xiàn)土壤細菌產(chǎn)己酸。1936年巴克氏(Barker)分離出產(chǎn)己酸的克魯瓦氏梭狀芽孢桿菌。1948年日本北原氏分離的棱菌，具有獨特的性能，命名為巴氏棱菌。巴克氏(1942)所使用的培養(yǎng)基分1號培養(yǎng)基和2號培養(yǎng)基兩種：
巴氏1號培養(yǎng)基：乙醇1％(V／V)，K2HPO40.5％，MgSO4?7H2O 0.01％，(NH4）2SO40.03％，F(xiàn)eSO47H2O 0.002％，酵母自溶液0.5％(V／V)，CaCO3約10％，加壓滅菌后，加入2％(V/V)的5％NaCO3溶液和1％(V／V)的1％Na2S?9H2O溶液，使培養(yǎng)基PH值達到7.0—7.4。
巴氏2號培養(yǎng)基：除含酵母自溶液20％(v／V)，乙醇0.5％(V／V)以外，其它無機鹽同1號培養(yǎng)基。
而北原氏用的培養(yǎng)基為巴克氏最初用于分離奧氏甲烷細菌的培養(yǎng)基，配方為；乙醇2％(V/V)，K2HPO4 0.04％，NH4Cl 0.075％，MgCl20.01％，CaCO3 2％，使用時每100毫升加含5％Na2CO3 和1％Na2S?H2O的溶液各3毫升，使培養(yǎng)基pH值達到7.0。
巴氏1948年所用的培養(yǎng)基又稍有改變；乙醇0.1—0.2g，脂肪酸鈉0.1—1.5g，KH2PO4—Na2HPO4緩沖液(1MpH7.0）2.5毫升，(NH4)2SO450mg，MgSO4?7H2O20mg，CaSO4?2H2OlMg，F(xiàn)eSO4?7H2O 0.5mg，MnSO4?4H2O 0.25mg，NaM0O4?2H2O 0.25mg，酵母浸汁75mg，Na2S?9H2O20mg，Na2CO310mg，蒸餾水100m1，調(diào)pH值至7.0—7.4。
與此同時，用于12公升試驗者，乙醇0.65％，乙酸鈉0.5％，其余同上。以上培養(yǎng)基的pH值為7.0—7.4。而老窖泥中己酸菌生長的環(huán)境為偏酸性，能否適于窖泥己酸菌的分離培養(yǎng)，有待試驗證明c
現(xiàn)將目前從白酒發(fā)酵老窖泥中，分離培養(yǎng)己酸菌所使用的培養(yǎng)基，及其擴大培養(yǎng)方法介紹如下：
1．培養(yǎng)基；
種子培養(yǎng)基：
乙酸鈉 0.5％．
硫酸銨 0.05％，
硫酸鎂 0.02％，
磷酸氫二鉀0.04％，
酵母膏 0.1％，
乙醇 2％(殺菌后，接種前加入)，
碳酸鈣 1％(稍后加)，
水 100％。
發(fā)酵培養(yǎng)基：
有如下幾種：
①同種子培養(yǎng)基。此法質(zhì)量較好，不易污染，但成本較高。
②液態(tài)法白酒
發(fā)酵糟水40—50％，
醋酸鈉0.3％，
碳酸鈣0.5％．
pH(用石灰乳中和)6.5—7.0，
酒精2％(稍后加)。
③固態(tài)法白酒酒糟20％，用水浸泡后。用石灰乳調(diào)至pH值6.5—7.0，煮沸，加2％酒精。
④固態(tài)法白酒發(fā)酵淋漿水，用石灰乳調(diào)pH值至6.5—7.0加水4倍，煮沸，冷后加酒精2％。
2．培養(yǎng)步驟：

①為保證厭氣條件，各代培養(yǎng)基必須裝滿容器，高液面培養(yǎng)，并用乙醇封口。瓶口可采用塑料布包封。
②只要不發(fā)生污染，生產(chǎn)中不必每代都從砂土管接種，可從中間擴大分割，如用卡氏罐、三角瓶，進行分割循環(huán),即將大部分清液移至下代后，在瓶底殘留物中，注入新培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)使用。
③己酸菌培養(yǎng)易發(fā)生氨細菌污染，使發(fā)酵液發(fā)黑、惡臭，己酸產(chǎn)量大幅度下降。為了避免這種情況，各代培養(yǎng)必須嚴(yán)格操作，保證必要的衛(wèi)生和無菌條件。同時應(yīng)適當(dāng)加大接種量，比如可加大接種量至10—20％。
④生長良好的已酸菌，可在培養(yǎng)液中見到較好的分層，并有己酸特有的清新氣味。產(chǎn)生細小的氣泡(H2)，表面不形成浮膜。