土著菌的概念:
土著菌就生活在我們周圍的自然環(huán)境中,走進(jìn)闊葉樹林或竹林,在落葉且腐殖質(zhì)多地方,扒開樹葉或雜草就可以看到細(xì)絲壯白色菌落,這就是有益的土著微生物。
土著微生物是多種有益微生物的混合群,土著微生物按好嫌氣性分有好氣菌、嫌氣菌;按菌種分有酵母菌、曲霉菌、放線菌、乳酸菌、芽孢菌等。
可以在不同的季節(jié)、不同的地點(diǎn)采集不同的菌種。采集到的原始菌種應(yīng)放在室內(nèi)陰涼、干燥處保存。
土著菌采集方法 :
1、采集地方:可以在當(dāng)?shù)厣缴下淙~聚集較多的山谷、樹林中采集。
2、具體辦法:把做的稍微有一點(diǎn)硬的大米飯(1kg~1.5kg),裝入用干凈杉木板做的小木箱(25cm×20cm×10cm)約三分之一,大米飯上面蓋上宣紙,封好口,將其埋在當(dāng)?shù)厣缴下淙~聚集較多的山谷樹林中。為防止野生動(dòng)物糟蹋,木箱最好罩上鐵絲網(wǎng)。夏季經(jīng)三~五天,春秋經(jīng)六~七天,周邊的土著微生物潛入到米飯中,在米飯上形成白色菌落(放置時(shí)間稍長時(shí)會(huì)形成各種顏色菌落,雖然也能利用,但最好還是用白色菌落)。
3、擴(kuò)陪方法:土著菌采集成功后摻入原材料量1/3左右的紅糖,將其混合均勻(數(shù)量按壇子容量的三分之一),把變的稀軟狀態(tài)的米飯裝入壇子里,蓋上宣紙,用線繩系好口,放置在溫度18℃左右地方。大約放置7天左右,就會(huì)變成濃稠液體狀態(tài),飯粒多少會(huì)有些殘留,但不礙事。簡單過濾后就是土著微生物菌種原液。 用的時(shí)候直接稀釋后和EM菌種原液一起使用!
以下步驟適用于菌種生產(chǎn)單位實(shí)驗(yàn)室!普通用戶可以不做!
4、提純復(fù)壯: 有條件的可以在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行
一般情況下,采來的樣品可以直接進(jìn)行分離,但是如果樣品中我們所需要的菌類含量并不很多,而另一些微生物卻大量存在。此時(shí),為了容易分離到所需要的菌種,讓無關(guān)的微生物至少是在數(shù)量上不要增加,即設(shè)法增加所要菌種的數(shù)量,以增加分離的幾率??梢酝ㄟ^選擇性的配制培養(yǎng)基(如營養(yǎng)成分、添加抑制劑等),選擇一定的培養(yǎng)條件(如培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)基酸堿度等)來控制。具體方法是根據(jù)微生物利用碳源的特點(diǎn),可選定糖、淀粉、纖維素,或者石油等,以其中的一種為唯一碳源,那么只有利用這一碳源的微生物才能大量正常生長,而其他微生物就可能死亡或淘汰。對(duì)G一菌有選擇的培養(yǎng)基(如結(jié)晶紫營養(yǎng)培養(yǎng)基、紅—紫膽汁瓊脂、煌綠膽汁瓊脂等)通常含有5%~10%的天然提取物。在分離細(xì)菌時(shí),培養(yǎng)基中添加濃度一般為50μg/m1的抗真菌劑(如放線菌酮和制霉素),可以抑制真菌的生長。在分離放線菌時(shí),通常于培養(yǎng)基中加入1~5m1天然浸出汁(植物、巖石、有機(jī)混合腐質(zhì)等的浸出汁) 作為最初分離的促進(jìn)因子,由此可以分離出更多不同類型的放線菌類型;放線菌還可以十分有效地利用低濃度的底物和復(fù)雜底物(如幾丁質(zhì)),因此,大多數(shù)放線菌的分離培養(yǎng)是在貧脊或復(fù)雜底物的瓊脂平板上進(jìn)行的,而不是在含豐富營養(yǎng)的生長培養(yǎng)基上分離的;在放線菌分離瓊脂中通常加入抗真菌劑制霉菌素或放線菌酮,以抑制真菌的繁殖;此外,為了對(duì)某些特殊種類的放線菌進(jìn)行富集和分離,可選擇性地添加一些抗生素(如新生霉素)。在分離真菌時(shí),利用低碳/氮比的培養(yǎng)基可使真菌生長菌落分散,利于計(jì)數(shù)、分離和簽定;在分離培養(yǎng)基中加入一定的抗生素如氯霉素、四環(huán)素、卡那霉素、青霉素、鏈霉素等即可有效地抑制細(xì)菌生長及其菌落形成;抑制細(xì)菌的另外一些方法有:在使用平皿之前,將平皿先干燥3~4天;降低培養(yǎng)基的pH值或在無法降低pH時(shí),加入1:30000玫瑰紅。這樣有利于下階段的純種分離。
通過增殖培養(yǎng),樣品中的微生物還是處于混雜生長狀態(tài)。因此還必須分離,純化。在這一步,增殖培養(yǎng)的選擇性控制條件還應(yīng)進(jìn)一步應(yīng)用,而且要控制得細(xì)一點(diǎn),好一點(diǎn)。同時(shí)必須進(jìn)行純種分離,常用的分離方法有稀釋分離法、劃線分離法和組織分離法。稀釋分離法的基本方法是將樣品進(jìn)行適當(dāng)稀釋,然后將稀釋液涂布于培養(yǎng)基平板上進(jìn)行培養(yǎng),待長出獨(dú)立的單個(gè)菌落,進(jìn)行挑選分離。劃線分離法要首先倒培養(yǎng)基平板,然后用接種針(接種環(huán))挑取樣品,在平板上劃線。劃線方法可用分步劃線法或一次劃線法,無論用哪種方法,基本原則是確保培養(yǎng)出單個(gè)菌落。組織分離法主要用于食用菌菌種或某些植物病原菌的分離。分離時(shí),首先用10%漂白粉或0.1%升汞液對(duì)植物或器官組織進(jìn)行表面消毒,用無菌水洗滌數(shù)次后,移植到培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基上,于適宜溫度培養(yǎng)數(shù)天后,可見微生物向組織塊周圍擴(kuò)展生長。經(jīng)菌落特征和細(xì)胞特征觀察確認(rèn)后,即可由菌落邊緣挑取部分菌種進(jìn)行移接斜面培養(yǎng)。
對(duì)于有些微生物如毛霉、根霉等在分離時(shí),由于其菌絲的蔓延性,極易生長成片,很難挑取單菌落。常在培養(yǎng)基中添加0.1%的去氧膽酸鈉或在察氏培養(yǎng)基中添加0.1%的山梨糖及0.01%的蔗糖,利于單菌落的分離。
經(jīng)過分離培養(yǎng),在平板上出現(xiàn)很多單個(gè)菌落,通過菌落形態(tài)觀察,選出所需菌落,然后取菌落的一半進(jìn)行菌種鑒定,對(duì)于符合目的菌特性的菌落,可將之轉(zhuǎn)移到試管斜面純培養(yǎng)。這種從自然界中分離得到的純種稱為野生型菌株,它只是篩選的第一步,所得菌種是否具有生產(chǎn)上的實(shí)用價(jià)值,能否作為生產(chǎn)菌株,還必須采用與生產(chǎn)相近的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件,通過三角瓶的容量進(jìn)行小型發(fā)酵試驗(yàn),以求得適合于工業(yè)生產(chǎn)用菌種。這一步是采用與生產(chǎn)相近的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件,通過三角瓶的容量進(jìn)行小型發(fā)酵試驗(yàn),以求得適合于工業(yè)生產(chǎn)用菌種。如果此野生型菌株產(chǎn)量偏低,達(dá)不到工業(yè)生產(chǎn)的要求,可以留之作為菌種選育的出發(fā)菌株。
活性好的土著菌可以用由人工培養(yǎng)、擴(kuò)陪成純度高的微生物菌群!
土著菌發(fā)酵床養(yǎng)豬技術(shù)、養(yǎng)雞技術(shù)是利用自然環(huán)境中的生物資源,采集土壤中的多種有益微生物進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)繁,使其形成有相當(dāng)活力的微生物母種,再按一定比例將微生物母種與鋸木屑等輔料和活性劑混合發(fā)酵形成有機(jī)墊料。讓豬、雞從小到大都生活在這種有機(jī)墊料上,豬、雞的排泄物被有機(jī)墊料里的微生物迅速降解、消化,不需進(jìn)行人工處理,達(dá)到零排放。