全自動(dòng)生化分析儀試劑存在的問(wèn)題及解決方法
張仲全
(山東省郯城縣第一人民醫(yī)院，山東，郯城，276100)
【摘要】 目前生化試劑種類繁多，如何正確合理的使用，充分提高檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，以便更好的為臨床診斷服務(wù)。
【關(guān)鍵詞】 全自動(dòng)生化分析儀；試劑；問(wèn)題
【中圖分類號(hào)】 R446．61 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1007—8517(2009)12—0071—02
1 優(yōu)質(zhì)的儀器用水
優(yōu)質(zhì)的儀器用水是使用好檢驗(yàn)試劑的一個(gè)十分重要環(huán)節(jié)之一。因?yàn)闇y(cè)定離子類的項(xiàng)目：比如銅、鐵、鋅、鈣、Mg、磷。
這些項(xiàng)目在使用過(guò)程中，儀器用水的質(zhì)量相當(dāng)重要，雖然現(xiàn)在一般醫(yī)院的生化儀都帶有制水系統(tǒng)，但制水系統(tǒng)基本都是制備去離子水，離子交換樹(shù)脂在使用一段時(shí)間后交換能力明顯下降，需要定期進(jìn)行更換，否則制備的水離子含量多，電導(dǎo)率偏高。使用含離子超標(biāo)的水沖洗儀器，直接影響檢驗(yàn)結(jié)果。再如血氨、二氧化碳項(xiàng)目，如果水質(zhì)不好，儀器用水中本身含氨和二氧化碳就很高，則檢測(cè)該項(xiàng)目的結(jié)果也會(huì)受到嚴(yán)重的影響。還有如果血清中含有GLDH，而儀器用水存在氨時(shí)，可消耗NADH，使利用NADH的酶聯(lián)連續(xù)監(jiān)測(cè)法結(jié)果偏高。解決辦法：定期監(jiān)測(cè)水質(zhì)，當(dāng)儀器用水的電阻小于1．0MQ時(shí)要更換離子交換樹(shù)脂或活性炭。
2 標(biāo)本的及時(shí)分離及測(cè)定
標(biāo)本的及時(shí)分離及測(cè)定是用好檢驗(yàn)試劑的首要環(huán)節(jié)因?yàn)榉彩抢肗ADH轉(zhuǎn)化為NAD 變化率來(lái)檢測(cè)其物質(zhì)含量的試驗(yàn)都或多或少受到血液存放時(shí)間的影響。原因是全血存放時(shí)間越長(zhǎng)，紅細(xì)胞利用血清中的糖進(jìn)行無(wú)氧酵解產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸使NADH轉(zhuǎn)化為NAD ，這樣使測(cè)定結(jié)果假性升高。解決辦法：①作好與臨床的溝通，對(duì)抽血人員和標(biāo)本運(yùn)送人員(傳遞人員)進(jìn)行培訓(xùn)；② 及時(shí)分離血清并及時(shí)檢測(cè)；③ 也可將全自動(dòng)生化分析儀上的延遲時(shí)間設(shè)置大于60秒，這樣試劑在延遲期內(nèi)消除丙酮酸的干擾，可完全避免假陽(yáng)性結(jié)果的出現(xiàn)。

3 交叉污染
3．1 生化分析儀本身的清洗問(wèn)題造成的交叉污染在使用
全自動(dòng)生化分析儀時(shí)，儀器的交叉污染現(xiàn)象是引起實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏離的一個(gè)原因。由于全自動(dòng)生化分析儀試劑針需要接觸各種試劑，一般難以徹底清洗干凈，所以容易造成分析項(xiàng)目的攜帶污染．而生化項(xiàng)目的測(cè)定往往僅需要幾微升樣本，試劑往往需要幾百微升，尤其在沒(méi)有自動(dòng)沖洗程序的流動(dòng)池式生化分析儀上，由于前帶現(xiàn)象的存在，如果前一個(gè)樣本為高值樣本，則接后的第一個(gè)低值標(biāo)本結(jié)果應(yīng)慎重報(bào)告。不僅沒(méi)有沖洗程序的生化分析儀器上有這種現(xiàn)象，就是具有自動(dòng)沖洗程序的全自動(dòng)生化分析儀也有交叉污染，例如Beckman全自動(dòng)生化分析儀CX4，它的試劑吸針(Probe)、樣品吸針及反應(yīng)攪拌棒是利用高壓沖洗液沖洗，然后用高壓壓縮空氣吹于，有時(shí)由于洗液壓力和壓縮空氣的壓力偏低，使試劑吸針、樣品吸針及反應(yīng)混勻棒沖不干凈、吹不干，從而導(dǎo)致反應(yīng)池之問(wèn)相互污染、試劑問(wèn)交又污染，使檢驗(yàn)結(jié)果偏離。另一個(gè)值得注意的問(wèn)題是許多生化儀器由于長(zhǎng)期頻繁的利用，使加樣針和試劑針的注射器磨損加重或注射器的“特氟龍”吸頭不及時(shí)更換，使吸樣針或試劑針密封層增大，產(chǎn)生泄漏現(xiàn)象也是造成樣本間及試劑間相互污染的一個(gè)重要原因。試劑吸樣或樣品吸樣不準(zhǔn)確，通常導(dǎo)致利用速率法測(cè)試的標(biāo)本系統(tǒng)偏低或偏高。眾所周知，速率法計(jì)算因子是由加樣體積和試劑體積參與確定的，如果加樣體積或加試劑體積不準(zhǔn)，導(dǎo)致真正速率計(jì)算因子和理論計(jì)算因子偏離，從而使檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。解決辦法：①定期進(jìn)行儀器維護(hù)保養(yǎng)；②按要求及時(shí)更換零部件；③定期對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)；④全自動(dòng)生化分析標(biāo)本和試劑用量少，殘存少量即會(huì)影響測(cè)試結(jié)果，每天應(yīng)用無(wú)水乙醇擦洗并定期更換干燥棒，保證比色杯清洗后不留殘液，避免比色杯的交叉污染。
3．2 檢驗(yàn)項(xiàng)目間的交叉污染在全自動(dòng)生化分析儀的使用中，我們發(fā)現(xiàn)一個(gè)項(xiàng)目會(huì)影響緊隨其后項(xiàng)目的測(cè)試結(jié)果，造成這種影響的原因之一是一種試劑中含有另一試驗(yàn)的測(cè)定物質(zhì)而直接干擾其測(cè)試結(jié)果。原因之二是一種試劑中含有改變另一試驗(yàn)反應(yīng)條件或影響其反應(yīng)進(jìn)程的物質(zhì)而間接干擾其測(cè)試結(jié)果。比如：在TP試劑中含有大量的CuSO4，如果將Cu放在TP項(xiàng)目的后面檢測(cè)，會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高或重復(fù)性差。再如P放在含有磷酸鹽的項(xiàng)目后面，TBA放在含有膽酸鹽的項(xiàng)目后面都會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高或重復(fù)性差。GLU放在CK和CK—MB的項(xiàng)目后面可能會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高或重復(fù)性差。LDH放在AIJT和AST的項(xiàng)目后面可能會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高或重復(fù)性差。Mg放在ALP等含有鎂離子項(xiàng)目后面可能會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高或重復(fù)性差。ca放在a—Amy項(xiàng)目后面可能會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高或重復(fù)性差。Mg試劑(CALMAGITE法)中含有EGTA，會(huì)干擾Ca的測(cè)定結(jié)果。另外我們發(fā)現(xiàn)相鄰兩個(gè)項(xiàng)目的PH值相差太大或反應(yīng)對(duì)PH要求嚴(yán)格的項(xiàng)目，也會(huì)對(duì)測(cè)定的結(jié)果產(chǎn)生影響，比如TP和Alb之間PH相差較大，會(huì)互相干擾，TBA放在Alb后面測(cè)定，會(huì)使測(cè)定結(jié)果偏低等等。解決辦法：①調(diào)整實(shí)驗(yàn)的前后順序來(lái)消除這種影響；②在造成污染的項(xiàng)目和受污染的項(xiàng)目之間設(shè)置清洗劑并設(shè)定進(jìn)行清洗的次數(shù)。
4 正確的參數(shù)設(shè)置也是用好檢驗(yàn)試劑的一個(gè)關(guān)鍵因素
現(xiàn)代化分析儀上通常有分析程序供用戶設(shè)定，包括樣品量、試劑量、波長(zhǎng)、分析方式和延遲時(shí)間、測(cè)試時(shí)間的設(shè)定等。下面我們就延遲時(shí)間和加樣程序的設(shè)定來(lái)說(shuō)明正確使用分析參數(shù)對(duì)于正確運(yùn)用試劑的作用。比如肌酐苦味酸測(cè)定法，我們?cè)谠O(shè)定延遲時(shí)間時(shí)應(yīng)注意到苦味酸在堿性條件下50秒前首先快速與如乙酰乙酸等快反應(yīng)物質(zhì)產(chǎn)生紅色化合物，而在120秒后堿性苦味酸又能與慢反應(yīng)物質(zhì)產(chǎn)生陽(yáng)性干擾，解決辦法：最好設(shè)定延遲時(shí)間為50～6O秒之間，測(cè)定時(shí)間小于6O秒，這樣就充分消除了快反應(yīng)和慢反應(yīng)干擾，從而檢測(cè)到真正肌酐含量。
5 校準(zhǔn)液的正確使用
由于目前生產(chǎn)廠家提供的校準(zhǔn)液并非通用的，只適用于某一特定的分析系統(tǒng)。同一項(xiàng)目不同方法學(xué)之間有很大差異，同一項(xiàng)目不同方法學(xué)的校準(zhǔn)液更不能混用，但是在臨床檢驗(yàn)中經(jīng)常會(huì)發(fā)生膽紅素釩酸鹽法用重氮法的校準(zhǔn)液校準(zhǔn)，乳酸脫氫酶L—P法用P—L法校準(zhǔn)液校準(zhǔn)。TBA循環(huán)酶法用比色法校準(zhǔn)液校準(zhǔn)等都會(huì)造成測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確。另外同一方法學(xué)，不同廠家的校準(zhǔn)品和試劑都會(huì)有所差異。解決辦法：①建議結(jié)合各實(shí)驗(yàn)室條件選擇適合自已實(shí)驗(yàn)室的校準(zhǔn)品，如有條件可進(jìn)行系統(tǒng)溯源；②建立滿足在同一方法學(xué)、同一測(cè)定條件、與理論計(jì)算的factor值差異不大，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)有明顯影響因素，方可進(jìn)行校正測(cè)定；③建立一個(gè)可靠的參考系統(tǒng)作為準(zhǔn)確性基礎(chǔ)，然后將準(zhǔn)確性轉(zhuǎn)移到“使用方法”測(cè)定中去，使“使用方法”測(cè)定結(jié)果可溯源到參考系統(tǒng)所提供的準(zhǔn)確性基礎(chǔ)上來(lái)。在實(shí)現(xiàn)溯源性目標(biāo)過(guò)程中，永遠(yuǎn)以患者新鮮標(biāo)本為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，以方法學(xué)對(duì)比試驗(yàn)方法為驗(yàn)證手段。采用回歸方程進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，斜率接近1，截距較小，說(shuō)明“使用方法”對(duì)標(biāo)本測(cè)定結(jié)果和溯源目標(biāo)參考系統(tǒng)對(duì)標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果非常接近，檢測(cè)結(jié)果可靠。
6 抗凝劑的使用
目前臨床上常用的抗凝劑有EDTA．．2K、肝素、草氨酸鈉等，TBA和AFU不能用肝素抗凝劑，因?yàn)楦嗡貢?huì)使TBA和AFU試劑發(fā)生混濁，導(dǎo)致吸光度假性偏高，從而使檢測(cè)結(jié)果偏高。解決辦法：①認(rèn)真參閱試劑說(shuō)明書(shū)；②作好與抽血人員之間的溝通和培訓(xùn)，使抽血人員知道什么項(xiàng)目用何種標(biāo)本。

7 混成單一試劑的問(wèn)題
比如酶法肌酐試劑，第一步R．中的酶要消除樣品中內(nèi)源性肌酸的干擾，如果混成單一試劑，則會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高，消除法HDL、LDL也不能混成單一試劑，因?yàn)樗鼈兌家謩e清除HDL和LDL以外的脂蛋白，從而達(dá)到檢測(cè)的目的，如果混成單一試劑，則會(huì)使測(cè)定的HDL和LDL不準(zhǔn)確。另外，有的試劑混成單一試劑后，穩(wěn)定性和抗干擾能力也會(huì)明顯下降。解決辦法：①在儀器通道或試劑位允許的情況下盡量使用雙試劑；②如一定要使用單一試劑，最好選擇試劑廠家針對(duì)部份項(xiàng)目專門生產(chǎn)好的單一試劑。
8 試劑開(kāi)瓶的問(wèn)題
隨著全自動(dòng)生化分析儀的普及，“開(kāi)瓶穩(wěn)定性”也隨之受到了大家的重視，但是就目前有的試劑方法學(xué)來(lái)講，還達(dá)不到人們所要求的試劑開(kāi)瓶后在儀器內(nèi)放很長(zhǎng)時(shí)間不需要定標(biāo)，比如ALP、TP、GSP等PH為堿性的試劑，開(kāi)瓶后試劑會(huì)吸收空氣中的二氧化碳，使試劑本身的PH值下降，如果長(zhǎng)時(shí)間開(kāi)瓶不定標(biāo)或校準(zhǔn)，會(huì)使檢測(cè)結(jié)果發(fā)生偏離，在國(guó)外有的項(xiàng)目有明文規(guī)定，必須72小時(shí)之內(nèi)定標(biāo)，比如BUN。但是在國(guó)內(nèi)的某些實(shí)驗(yàn)室為了方便，很長(zhǎng)時(shí)間都不作校準(zhǔn)，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果的不準(zhǔn)確。解決辦法：了解試劑的特性，及時(shí)對(duì)部份項(xiàng)目進(jìn)行校準(zhǔn)，2．對(duì)于每天標(biāo)本量不多的醫(yī)院，可按1～2天的用量取用試劑放入儀器。

9 不同批號(hào)試劑相混的問(wèn)題
目前將不同批號(hào)的試劑混合在一起使用的現(xiàn)象在檢驗(yàn)中經(jīng)常發(fā)生，當(dāng)然這一方面是為了節(jié)省成本，另一方面為了方便。但是不管是什么品牌、什么試劑，由于不同批號(hào)的試劑生產(chǎn)時(shí)間不同，試劑中工具酶的活性會(huì)有差異，會(huì)發(fā)生水解的底物濃度隨時(shí)間長(zhǎng)短也會(huì)不同。因此混在一起使用而又不定標(biāo)，可能會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。還有如果有的試劑開(kāi)瓶時(shí)間太長(zhǎng)，空氣中的灰塵或細(xì)菌會(huì)進(jìn)入瓶中，由于有的試劑含有大量的蛋白質(zhì)和鹽，是細(xì)菌生長(zhǎng)的最好條件，雖然有的試劑添加了防腐劑，但防腐劑的防腐也是有一定限度的，而且絕大多數(shù)廠家的試劑中是沒(méi)有加防霉劑的。解決辦法：① 不同批號(hào)試劑建議不要混用，如果混用最好重新定標(biāo)；②試劑瓶在儀器內(nèi)使用時(shí)間不要過(guò)長(zhǎng)，及時(shí)更換。③一般每個(gè)試劑瓶?jī)?nèi)由于試劑針不能吸完，或多或少都會(huì)留有幾毫升的試劑，如果是同一批號(hào)可以將未開(kāi)瓶的同一批號(hào)試劑往里倒。但如果不是同一批號(hào)的試劑時(shí)倒人后最好定標(biāo)，最好的做法是將每個(gè)批號(hào)的剩余試劑留起來(lái)待一定數(shù)量后混在一起，然后重新定標(biāo)后檢測(cè)。通過(guò)我們這幾年使用伊得利康試劑，參加衛(wèi)生部的室間質(zhì)評(píng)都取得很好的成績(jī)，確實(shí)認(rèn)為該公司試劑質(zhì)量好。