【發(fā)布單位】國家環(huán)境保護總局
【發(fā)布文號】國家環(huán)境保護總局公告2005年第35號
【發(fā)布日期】2005-07-27
【生效日期】2006-01-01
【失效日期】-----------
【所屬類別】政策參考
【文件來源】國家環(huán)境保護總局
國家環(huán)境保護總局公告2005年第35號
醫(yī)療機構(gòu)水污染物排放標準
為貫徹《中華人民共和國環(huán)境保護法》，加強對醫(yī)療機構(gòu)污水、污水處理站廢氣、污泥排放的控制和管理，預防和控制傳染病的發(fā)生和流行，保障人體健康，加強環(huán)境管理，現(xiàn)批準《醫(yī)療機構(gòu)水污染物排放標準》為國家污染物排放標準，并由我局和國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局聯(lián)合發(fā)布。
標準編號、名稱如下：
GB18466－2005醫(yī)療機構(gòu)水污染物排放標準
本標準自實施之日起，代替《污水綜合排放標準》（GB8978-1996）中有關醫(yī)療機構(gòu)水污染物排放標準部分，并取代《醫(yī)療機構(gòu)污水排放要求》（GB18466-2001）。
上述標準為強制性標準，由中國環(huán)境科學出版社出版，自2006年1月1日起實施。
標準信息可在國家環(huán)境保護總局網(wǎng)站（www.sepa.gov.cn)和中國環(huán)境標準網(wǎng)站(www.es.org.cn)上查詢。
特此公告?！ ?br>
附件：醫(yī)療機構(gòu)水污染物排放標準
二○○五年七月二十七日
醫(yī)療機構(gòu)水污染物排放標準
Discharge standard of water pollutants for medical organization
前 言
為貫徹《中華人民共和國環(huán)境保護法》、《中華人民共和國水污染防治法》、《中華人民共和國海洋環(huán)境保護法》、《中華人民共和國大氣污染防治法》、《中華人民共和國傳染病防治法》，加強對醫(yī)療機構(gòu)污水、污水處理站廢氣、污泥排放的控制和管理，預防和控制傳染病的發(fā)生和流行，保障人體健康，維護良好的生態(tài)環(huán)境，制定本標準。
本標準規(guī)定了醫(yī)療機構(gòu)污水及污水處理站產(chǎn)生的廢氣和污泥的污染物控制項目及其排放限值、處理工藝與消毒要求、取樣與監(jiān)測和標準的實施與監(jiān)督等。
本標準自實施之日起，代替GB8978-1996《污水綜合排放標準》中有關醫(yī)療機構(gòu)水污染物排放標準部分，并取代GB18466-2001《醫(yī)療機構(gòu)污水排放要求》。新、擴、改醫(yī)療機構(gòu)自本標準實施之日起按本標準實施管理，現(xiàn)有醫(yī)療機構(gòu)在2007年12月31日前達到本標準要求。
本標準的附錄A、附錄B、附錄C、附錄D、附錄E和附錄F為規(guī)范性附錄。
本標準為首次發(fā)布。
本標準由國家環(huán)境保護總局科技標準司提出并歸口。
本標準委托北京市環(huán)境保護科學研究院和中國疾病預防控制中心起草。
本標準由國家環(huán)境保護總局2005年07月27日批準。
本標準由國家環(huán)境保護總局負責解釋。
醫(yī)療機構(gòu)水污染物排放標準
1范圍
本標準規(guī)定了醫(yī)療機構(gòu)污水、污水處理站產(chǎn)生的廢氣、污泥的污染物控制項目及其排放和控制限值、處理工藝和消毒要求、取樣與監(jiān)測和標準的實施與監(jiān)督。
本標準適用于醫(yī)療機構(gòu)污水、污水處理站產(chǎn)生污泥及廢氣排放的控制，醫(yī)療機構(gòu)建設項目的環(huán)境影響評價、環(huán)境保護設施設計、竣工驗收及驗收后的排放管理。當醫(yī)療機構(gòu)的辦公區(qū)、非醫(yī)療生活區(qū)等污水與病區(qū)污水合流收集時，其綜合污水排放均執(zhí)行本標準。建有分流污水收集系統(tǒng)的醫(yī)療機構(gòu)，其非病區(qū)生活區(qū)污水排放執(zhí)行GB8978的相關規(guī)定。
2規(guī)范性引用文件
下列標準和本標準表5、表6所列分析方法標準及規(guī)范所含條文在本標準中被引用即構(gòu)成為本標準的條文，與本標準同效。當上述標準和規(guī)范被修訂時，應使用其最新版本。
GB8978 污水綜合排放標準
GB3838 地表水環(huán)境質(zhì)量標準
GB3097 海水水質(zhì)標準
GB16297 大氣污染物綜合排放標準
HJ/T55 大氣污染物無組織排放監(jiān)測技術導則
HJ/T91 地表水和污水檢測技術規(guī)范
3術語和定義
本標準采用下列定義。
3.1醫(yī)療機構(gòu) medical organization
指從事疾病診斷、治療活動的醫(yī)院、衛(wèi)生院、療養(yǎng)院、門診部、診所、衛(wèi)生急救站等。
3.2醫(yī)療機構(gòu)污水 medical organization wastewater
指醫(yī)療機構(gòu)門診、病房、手術室、各類檢驗室、病理解剖室、放射室、洗衣房、太平間等處排出的診療、生活及糞便污水。當醫(yī)療機構(gòu)其他污水與上述污水混合排出時一律視為醫(yī)療機構(gòu)污水。
3.3污泥 sludge
指醫(yī)療機構(gòu)污水處理過程中產(chǎn)生的柵渣、沉淀污泥和化糞池污泥。
3.4廢氣 waste gas
指醫(yī)療機構(gòu)污水處理過程中產(chǎn)生的有害氣體。
4技術內(nèi)容
4.1污水排放要求
4.1.1傳染病和結(jié)核病醫(yī)療機構(gòu)污水排放執(zhí)行表1的規(guī)定。
4.1.2縣級及縣級以上或20張床位及以上的綜合醫(yī)療機構(gòu)和其他醫(yī)療機構(gòu)污水排放執(zhí)行表2的規(guī)定。直接或間接排入地表水體和海域的污水執(zhí)行排放標準，排入終端已建有正常運行城鎮(zhèn)二級污水處理廠的下水道的污水，執(zhí)行預處理標準。
4.1.3縣級以下或20張床位以下的綜合醫(yī)療機構(gòu)和其他所有醫(yī)療機構(gòu)污水經(jīng)消毒處理后方可排放。
4.1.4禁止向GB3838I、II類水域和III類水域的飲用水保護區(qū)和游泳區(qū)，GB3097一、二類海域直接排放醫(yī)療機構(gòu)污水。
4.1.5帶傳染病房的綜合醫(yī)療機構(gòu)，應將傳染病房污水與非傳染病房污水分開。傳染病房的污水、糞便經(jīng)過消毒后方可與其他污水合并處理。
4.1.6采用含氯消毒劑進行消毒的醫(yī)療機構(gòu)污水，若直接排入地表水體和海域，應進行脫氯處理，使總余氯小于0.5mg/L。
表1 傳染病、結(jié)核病醫(yī)療機構(gòu)水污染物排放限值（日均值）
序號 控制項目 標準值
1 糞大腸菌群數(shù)（MPN/L） 100
2 腸道致病菌 不得檢出
3 腸道病毒 不得檢出
4 結(jié)核桿菌 不得檢出
5 PH 6-9
6 化學需氧量（COD）濃度 （mg/L）最高允許排放負荷（g/床位） 6060
7 生化需氧量（BOD）濃度 （mg/L）最高允許排放負荷（g/床位） 2020
8 懸浮物（SS）濃度 （mg/L）最高允許排放負荷（g/床位） 2020
9 氨氮（mg/L） 15
10 動植物油（mg/L） 5
11 石油類（mg/L） 5
12 陰離子表面活性劑（mg/L） 5
13 色度（稀釋倍數(shù)） 30
14 揮發(fā)酚（mg/L） 0.5
15 總氰化物（mg/L） 0.5
16 總汞（mg/L） 0.05
17 總鎘（mg/L） 0.1
18 總鉻（mg/L） 1.5
19 六價鉻（mg/L） 0.5
20 總砷（mg/L） 0.5
21 總鉛（mg/L） 1.0
22 總銀（mg/L） 0.5
23 總A(Bq/L) 1
24 總B(Bq/L) 10
25 總余氯1）2（mg/L）（直接排入水體的要求） 0.5
注：1）采用含氯消毒劑消毒的工藝控制要求為： 消毒接觸池的接觸時間≥1.5h，接觸池出口總余氯6.5-10 mg/L?！ ?）采用其他消毒劑對總余氯不作要求。
表2 綜合醫(yī)療機構(gòu)和其他醫(yī)療機構(gòu)水污染物排放限值（日均值）
序號 控制項目 排放標準 預處理標準
1 糞大腸菌群數(shù)（MPN/L） 500 5000
2 腸道致病菌 不得檢出 -
3 腸道病毒 不得檢出 -
4 pH 6-9 6-9
5 化學需氧量（COD）濃度 （mg/L）最高允許排放負荷（g/床位） 6060 250250
6 生化需氧量（BOD）濃度 （mg/L）最高允許排放負荷（g/床位） 2020 100100
7 懸浮物（SS）濃度 （mg/L）最高允許排放負荷（g/床位） 2020 6060
8 氨氮（mg/L） 15 -
9 動植物油（mg/L） 5 20
10 石油類（mg/L） 5 20
11 陰離子表面活性劑（mg/L） 5 10
12 色度（稀釋倍數(shù)） 30 -
13 揮發(fā)酚（mg/L） 0.5 1.0
14 總氰化物（mg/L） 0.5 0.5
15 總汞（mg/L） 0.05 0.05
16 總鎘（mg/L） 0.1 0.1
17 總鉻（mg/L） 1.5 1.5
18 六價鉻（mg/L） 0.5 0.5
19 總砷（mg/L） 0.5 0.5
20 總鉛（mg/L） 1.0 1.0
21 總銀（mg/L） 0.5 0.5
22 總A(Bq/L) 1 1
23 總B(Bq/L) 10 10
24 總余氯1）2）（mg/L） 0.5 -
注：1）采用含氯消毒劑消毒的工藝控制要求為：一級標準：消毒接觸池接觸時間≥1h，接觸池出口總余氯3-10 mg/L?！ 《墭藴剩合窘佑|池接觸時間≥1h，接觸池出口總余氯2-8 mg/L?！ ?2）采用其他消毒劑對總余氯不作要求。
4.2廢氣排放要求
4.2.1污水處理站排出的廢氣應進行除臭除味處理，保證污水處理站周邊空氣中污染物達到表3要求。
4.2.2傳染病和結(jié)核病醫(yī)療機構(gòu)應對污水處理站排出的廢氣進行消毒處理。
表3 污水處理站周邊大氣污染物最高允許濃度
序號 控制項目 標準值
1 氨（mg/m3） 1.0
2 硫化氫（mg/m3） 0.03
3 臭氣濃度（無量綱） 10
4 氯氣（mg/m3） 0.1
5 甲烷（指處理站內(nèi)最高體積百分數(shù) %） 1%
4.3污泥控制與處置
4.3.1柵渣、化糞池和污水處理站污泥屬危險廢物，應按危險廢物進行處理和處置。
4.3.2污泥清淘前應進行監(jiān)測，達到表4要求。
表4 醫(yī)療機構(gòu)污泥控制標準
醫(yī)療機構(gòu)類別 糞大腸菌群數(shù)(MPN/g) 腸道致病菌 腸道病毒 結(jié)核桿菌 蛔蟲卵死亡率（%）
傳染病醫(yī)療機構(gòu) ≤100 不得檢出 不得檢出 - >95
結(jié)核病醫(yī)療機構(gòu) ≤100 - - 不得檢出 >95
綜合醫(yī)療機構(gòu)和其它醫(yī)療機構(gòu) ≤100 - - - >95
5處理工藝與消毒要求
5.1醫(yī)療機構(gòu)病區(qū)和非病區(qū)的污水，傳染病區(qū)和非傳染病區(qū)的污水應分流，不得將固體傳染性廢物、各種化學廢液棄置和傾倒排入下水道。
5.2傳染病醫(yī)療機構(gòu)和綜合醫(yī)療機構(gòu)的傳染病房應設專用化糞池，收集經(jīng)消毒處理后的糞便排泄物等傳染性廢物。
5.3化糞池應按最高日排水量設計，停留時間為24-36h。清掏周期為180-360d。
5.4醫(yī)療機構(gòu)的各種特殊排水應單獨收集并進行處理后，再排入醫(yī)院污水處理系統(tǒng)。
5.4.1低放射性廢水應經(jīng)衰變池處理。
5.4.2洗相室廢液應回收銀，并對廢液進行處理。
5.4.3口腔科含汞廢水應進行除汞處理。
5.4.4檢驗室廢水應根據(jù)使用化學品的性質(zhì)單獨收集，單獨處理。
5.4.5含油廢水應設置隔油池處理。
5.5傳染病醫(yī)療機構(gòu)和結(jié)核病醫(yī)療機構(gòu)污水處理宜采用二級處理+消毒工藝或深度處理+消毒工藝。
5.6綜合醫(yī)療機構(gòu)污水排放執(zhí)行排放標準時，宜采用二級處理+消毒工藝或深度處理+消毒工藝；執(zhí)行預處理標準時宜采用一級處理或一級強化處理+消毒工藝。
5.7消毒劑應根據(jù)技術經(jīng)濟分析選用，通常使用的有：二氧化氯、次氯酸鈉、液氯、紫外線和臭氧等。采用含氯消毒劑時按表1、表2要求設計。
5.7.1采用紫外線消毒，污水懸浮物濃度應小于10 mg/L，照射劑量30-40mJ/cm2,照射接觸時間應大于10s或由試驗確定。
5.7.2采用臭氧消毒，污水懸浮物濃度應小于20 mg/L，臭氧用量應大于10mg/L,接觸時間應大于12min或由試驗確定。
6取樣與監(jiān)測
6.1污水取樣與監(jiān)測
6.1.1應按規(guī)定設置科室處理設施排出口和單位污水外排口，并設置排放口標志。
6.1.2表1第16-22項，表2第15-21項在科室處理設施排出口取樣，總A、總B在衰變池出口取樣監(jiān)測。其它污染物的采樣點一律設在排污單位的外排口。
6.1.2醫(yī)療機構(gòu)污水外排口處應設污水計量裝置，并宜設污水比例采樣器和在線監(jiān)測設備。
6.1.3 監(jiān)測頻率
6.1.3.1糞大腸菌群數(shù)每月監(jiān)測不得少于1次。采用含氯消毒劑消毒時，接觸池出口總余氯每日監(jiān)測不得少于2次（采用間歇式消毒處理的，每次排放前監(jiān)測）。
6.1.3.2腸道致病菌主要監(jiān)測沙門氏菌、志賀氏菌。沙門氏菌的監(jiān)測，每季度不少于1次；志賀氏菌的監(jiān)測，每年不少于2次。其他致病菌和腸道病毒按6.1.3.3規(guī)定進行監(jiān)測。結(jié)核病醫(yī)療機構(gòu)根據(jù)需要監(jiān)測結(jié)核桿菌。
6.1.3.3收治了傳染病病人的醫(yī)院應加強對腸道致病菌和腸道病毒的監(jiān)測。同時收治的感染上同一種腸道致病菌或腸道病毒的甲類傳染病病人數(shù)超過5人、或乙類傳染病病人數(shù)超過10人、或丙類傳染病病人數(shù)超過20人時，應及時監(jiān)測該種傳染病病原體。
6.1.3.4理化指標監(jiān)測頻率：pH 每日監(jiān)測不少于2次，COD和SS每周監(jiān)測1次，其他污染物每季度監(jiān)測不少于1次。
6.1.3.5 采樣頻率：每4小時采樣1次，一日至少采樣3次，測定結(jié)果以日均值計。
6.1.4監(jiān)督性監(jiān)測按HJ/T91執(zhí)行。
6.1.5監(jiān)測分析方法按表5和附錄。
6.1.6污染物單位排放負荷計算見附錄F。
表5 水污染物監(jiān)測分析方法
序號 控制項目 測 定 方 法 測定下限（mg/L） 方法來源
1 糞大腸菌群數(shù) 多管發(fā)酵法 附錄A
2 沙門氏菌 附錄B
3 志賀氏菌 附錄C
4 結(jié)核桿菌 附錄E
5 總余氯 N,N-二乙基-1,4-苯二胺分光光度法N,N-二乙基-1,4-苯二胺滴定法 GB11898GB11897
6 化學需氧量(COD) 重鉻酸鹽法 30 GB11914
7 生化需氧量(BOD) 稀釋與接種法 2 GB7488
8 懸浮物(SS) 重量法 GB11901
9 氨氮 蒸餾和滴定法比色法 0.20.05 GB7478 GB7479
10 動植物油 紅外光度法 0.1 GB/T16488
11 石油類 紅外光度法 0.1 GB/T16488
12 陰離子表面活性劑 亞甲藍分光光度法 0.05 GB7494
13 色 度 稀釋倍數(shù)法 GB11903
14 pH值 玻璃電極法 GB6920
15 總 汞 冷吸收分光光度法雙硫腙分光光度法 0.00010.002 GB7468GB7469
16 揮發(fā)酚 蒸餾后4-氨基安替比林分光光度法 0.002 GB7490
17 總氰化物 硝酸銀滴定法異煙酸-吡唑啉酮比色法吡啶-巴比妥酸比色法 0.250.0040.002 GB7486GB7486GB7486
18 總 鎘 原子吸收分光光度法（螯合萃取法）雙硫腙分光光度法 0.0010.001 GB7475GB7471
19 總 鉻 高錳酸鉀氧化－二苯碳酰二肼分光光度法 0.004 GB7466
20 六價鉻 二苯碳酰二肼分光光度法 0.004 GB7467
21 總 砷 二乙基二硫代氨基甲酸銀分光光度法 0.007 GB7485
22 總 鉛 原子吸收分光光度法（螯合萃取法）雙硫腙分光光度法 0.010.01 GB7475GB7470
23 總 銀 火焰原子吸收分光光度法鎘試劑2B分光光度法 0.030.01 GB119079 GB11908
24 總A 厚源法 0.05Bq/L EJ/T1075
25 總B 蒸發(fā)法 EJ/T900
6.2大氣取樣與監(jiān)測
6.2.1污水處理站大氣監(jiān)測點的布置方法與采樣方法按GB16297中附錄C和HJ/T55的有關規(guī)定執(zhí)行。
6.2.2采樣頻率，每2h采樣一次，共采集4次，取其最大測定值。每季度監(jiān)測一次。
6.2.3監(jiān)測分析方法按表6。
表6 大氣污染物監(jiān)測分析方法
序號 控制項目 測定方法 方法來源
1 氨 次氯酸鈉-水楊酸分光光度法 GB/T14679
2 硫化氫 氣相色譜法 GB/T14678
3 臭氣濃度（無量綱） 三點比較式臭袋法 GB/T14675
4 氯氣 甲基橙分光光度法 HJ/T30
5 甲烷 氣相色譜法 CJ/3037
6.3污泥取樣與監(jiān)測
6.3.1取樣方法，采用多點取樣，樣品應有代表性，樣品重量不小于1kg。清掏前監(jiān)測?！ ?
6.3.2監(jiān)測分析方法見附錄A、附錄B、附錄C、附錄D和附錄E。
7標準的實施與監(jiān)督
7.1本標準由縣級以上人民政府環(huán)境保護行政主管部門負責監(jiān)督實施。
7.2省、自治區(qū)、直轄市人民政府對執(zhí)行本標準不能達到本地區(qū)環(huán)境功能要求時，可以根據(jù)總量控制要求和環(huán)境影響評價結(jié)果制定嚴于本標準的地方污染物排放標準。
附錄 A
（規(guī)范性附錄）
醫(yī)療機構(gòu)污水和污泥中糞大腸菌群的檢驗方法
A1 儀器和設備
A1.1 高壓蒸汽滅菌器。
A1.2 干燥滅菌箱。
A1.3 培養(yǎng)箱：37℃。
A1.4 恒溫水浴箱。
A1.5 電爐。
A1.6 天平。
A1.7 滅菌平皿。
A1.8 滅菌刻度吸管。
A1.9 酒精燈
A2 培養(yǎng)基和試劑
A2.1 乳糖膽鹽培養(yǎng)液
A2.1.1成分
蛋白胨 20g
豬膽鹽（或牛、羊膽鹽） 5g
乳糖 5g
0.4％溴甲酚紫水溶液 2.5mL
蒸餾水 1000mL
A2.1.2 制法
將蛋白胨、豬膽鹽及乳糖溶解于1000mL蒸餾水中，調(diào)整pH到7.4，加入指示劑，充分混勻，分裝于內(nèi)有倒管的試管中。115℃下滅菌20min。貯存于冷暗處備用。
A2.2 三倍濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液
A2.2.1成分
蛋白胨 60g
豬膽鹽（或牛、羊膽鹽） 15g
乳糖 15g
0.4％溴甲酚紫水溶液 7.5mL
蒸餾水 1000mL
A2.2.2 制法
制法同附錄A2.1.2。
A2.3 伊紅美蘭培養(yǎng)基（EMB培養(yǎng)基）
A2.3.1 成分
蛋白胨 10g
乳糖 10g
磷酸氫二鉀 2g
瓊脂 20g
2％伊紅水溶液 20mL
0.5％美藍水溶液 13mL
蒸餾水 1000mL
A2.3.2 制法
將瓊脂加到900mL蒸餾水中，加熱溶解，然后加入磷酸氫二鉀和蛋白胨，混勻使溶解，再加入蒸餾水補足至1000mL，調(diào)整pH至7.2～7.4。趁熱用脫脂棉和砂布過濾，再加入乳糖，混勻，定量分裝于燒瓶內(nèi)，115℃滅菌20min。作為儲備培養(yǎng)基貯存于冷暗處備用。
臨用時，加熱融化儲備培養(yǎng)基，待冷至60℃左右，根據(jù)燒瓶內(nèi)培養(yǎng)基的容量，加入一定量的已滅菌的2％伊紅水溶液和0.5％美藍水溶液，充分搖勻（防止產(chǎn)生氣泡）。傾注平皿備用。
A2.4 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液
A2.4.1成分
蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
乳糖 5g
氯化鈉 5g
1.6％溴甲酚紫乙醇溶液 1mL
蒸餾水 1000mL
A2.4.2 制法
將蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化鈉加熱溶解于1000mL蒸餾水中，調(diào)整pH到7.2～7.4，加入1.6％溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混勻，分裝于內(nèi)有倒管的試管中。115℃下滅菌20min。貯存于冷暗處備用。
A2.5 革蘭氏染色液
A2.5.1 結(jié)晶紫染色液
結(jié)晶紫 1g
95％乙醇溶液 20mL
1％草酸銨水溶液 1000mL
將結(jié)晶紫溶于乙醇中，然后與草酸銨水溶液混合。
A2.5.2 革蘭氏碘液
碘 1g
碘化鉀 2g
蒸餾水 300mL
將碘與碘化鉀混合，加入蒸餾水少許，充分搖勻，待完全溶解，再加入蒸餾水至300mL。
A2.5.3 脫色液
95％乙醇。
A2.5.4 沙黃復染液
沙黃 1g
95％乙醇 2g
蒸餾水 90mL
將沙黃溶于95％乙醇中，然后用蒸餾水稀釋。
A2.6 染色法
染色的基本步驟為：1）涂片：在載玻片上滴加一滴生理鹽水，用滅菌的接種環(huán)取菌落少許，與生理鹽水混勻，涂布成薄膜；2）干燥：在室溫中使自然干燥；3）固定：將涂片迅速通過火焰2～3次，以載玻片反面接觸皮膚，熱而不燙為度；4）染色：滴加結(jié)晶紫染色液，染色1min，水洗；5）媒染：滴加革蘭氏碘液，作用1min，水洗；6）脫色：滴加95％乙醇脫色，約30s，水洗；7）復染：滴加復染液，復染1min，水洗。
革蘭氏陽性菌染色后呈紫色，革蘭氏陰性菌染色后呈紅色。
注：亦可用1：10稀釋的石炭酸復紅染色液作復染劑，復染時間為10s。
A3 檢驗程序
檢驗程序見圖A.
A4 操作步驟
A4.1 樣品準備
A4.1.1 污水
污水樣品應至少取200mL，使用前應充分混勻。
根據(jù)預計的污水樣品中糞大腸菌群數(shù)確定污水樣品接種量。糞大腸菌群數(shù)量相對較少的接種量一般為10mL、1mL、0.1mL。糞大腸菌群數(shù)較多時接種量為1mL、0.1mL、0.01mL或0.1mL、0.01mL、0.001mL等。
接種量少于1mL時，水樣應制成稀釋樣品后供發(fā)酵試驗使用。接種量為0.1mL、0.01mL時，取稀釋比分別為1:10、1:100。其它接種量的稀釋比依此類推。
1:10稀釋樣品的制作方法為：吸取1mL水樣，注入到盛有9mL滅菌水的試管中，混勻，制成1:10稀釋樣品。因此，取1mL1:10稀釋樣品，等于取0.1mL污水樣品。其它稀釋比的稀釋樣品同法制作。
注1：若樣品為經(jīng)過氯消毒的污水，應在采樣后立即用5％硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。
A4.1.2 污泥
污泥樣品應至少取200g，使用前應充分混勻。
根據(jù)預計的污泥樣品中糞大腸菌群數(shù)量確定污泥樣品接種量。糞大腸菌群數(shù)量相對較少的污泥樣品接種量一般為0.1g、0.01g、0.001g。糞大腸菌群數(shù)量較多時接種量為0.01g、0.001g、0.0001g或0.001g、0.0001g、0.00001g等。
污泥樣品應制成稀釋樣品后供發(fā)酵試驗使用。接種量0.1g、0.01g、0.001g的稀釋樣品制作方法如下：取20g污泥樣品，加入到三角燒瓶中，加滅菌水使成200mL，混勻，制成1:10稀釋樣品。吸取1:10稀釋樣品1mL，注入到盛有9mL滅菌水的試管中，混勻，制成1:100稀釋樣品。按同法制成1:1000稀釋樣品。接種1mL1:10、1:100、1:1000稀釋樣品等于接種0.1g、0.01g、0.001g污泥樣品。
注1：若樣品為經(jīng)過氯消毒的污泥，應在采樣后立即用5％硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。
A4.2 發(fā)酵試驗
將樣品接種于裝有乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管（內(nèi)有小倒管）中，44℃培養(yǎng)24h。樣品接種體積以及管內(nèi)乳糖膽鹽培養(yǎng)液的濃度與體積根據(jù)以下條件確定：
樣品為污水時，取三個接種量、每個接種量的樣品分別接種于5個試管內(nèi)，共需15個試管。試管內(nèi)乳糖膽鹽培養(yǎng)液的濃度與體積應根據(jù)接種量確定。若接種量為10mL，吸取10mL樣品接種于裝有5mL三倍濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內(nèi)；若接種量為1mL時，吸取1mL樣品接種于裝有10mL普通濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內(nèi)；若接種量少于1mL時，吸取1mL稀釋樣品接種于裝有10mL普通濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內(nèi)。
樣品為污泥時，取三個接種量、每個接種量的稀釋樣品分別接種于3個試管內(nèi)，共需9個試管。9個試管中，各裝有10mL乳糖膽鹽培養(yǎng)液。各個試管接種稀釋樣品體積均為1mL。
A4.3 平板分離
大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸時培養(yǎng)液變色、產(chǎn)氣時小倒管內(nèi)出現(xiàn)氣泡。經(jīng)24h培養(yǎng)后，將產(chǎn)酸的試管內(nèi)培養(yǎng)液分別劃線接種于EMB培養(yǎng)基上。置于37℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)18～24h。
A4.4 鑒定
挑選可疑糞大腸菌群菌落，進行革蘭氏染色和鏡檢。可疑菌落有：1）深紫黑色，具有金屬光澤的菌落；2）紫黑色，不帶或略帶金屑光澤的菌落；3）淡紫紅色，中心色較深的菌落。
上述涂片鏡檢的菌落如為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，則挑取上述典型菌落1～3個接種于盛有5mL乳糖蛋白胨培養(yǎng)液倒管和倒管的試管內(nèi)，置于44℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。產(chǎn)酸產(chǎn)氣試管為糞大腸菌群陽性管。
A5 計數(shù)
根據(jù)證實有糞大腸菌群存在的陽性管數(shù)，查表A1或A2可得100mL污水或1g污泥中糞大腸菌群MPN值。
由于表A1和表A2是按一定的三個10倍濃度差接種量設計的（污水接種量為10mL、1mL和0.1mL，污泥接種量為0.1g、0.01g和0.001g），當采用其他三個10倍濃度差接種量時，需要修正表內(nèi)MPN值，具體方法如下：
表內(nèi)所列污水（污泥）最大接種量增加10倍時表內(nèi)MPN值相應降低10倍；污水（污泥）最大接種量減少10倍時表內(nèi)MPN值相應增加10倍。如污水接種量改為1mL、0.1mL和0.01mL時，A1表內(nèi)MPN值相應增加10倍。其它的三個10倍濃度差接種量的MPN值相應類推。
由于A1表內(nèi)MPN值的單位為每100mL污水樣品中MPN值，而污水以1L為報告單位，因此需將查A1表得到的MPN值乘上10，換算成1L污水樣品中的MPN值。
表A1 污水中糞大腸菌群最可能數(shù)（MPN）檢索表
（污水樣品接種量為5份10mL水樣，5份1mL水樣和5份0.1mL水樣）
陽性管數(shù) 每100mL水樣中MPN 陽性管數(shù) 每100mL水樣中MPN 陽性管數(shù) 每100mL水樣中MPN
接種100mL水樣 接種10mL水樣 接種0.1mL水樣 接種100mL水樣 接種10mL水樣 接種0.1mL水樣 接種100mL水樣 接種10mL水樣 接種0.1mL水樣
0 0 0 0 2 0 0 5 4 0 0 13
0 0 1 2 2 0 1 7 4 0 1 17
0 0 2 4 2 0 2 9 4 0 2 21
0 0 3 5 2 0 3 12 4 0 3 25
0 0 4 7 2 0 4 14 4 0 4 30
0 0 5 9 2 0 5 16 4 0 5 36
0 1 0 2 2 1 0 7 4 1 0 17
0 1 1 4 2 1 1 9 4 1 1 21
0 1 2 6 2 1 2 12 4 1 2 26
0 1 3 7 2 1 3 14 1 1 3 31
0 1 4 9 2 1 4 17 4 1 4 36
0 1 5 11 2 1 5 19 4 1 5 42
0 2 0 4 2 2 0 9 4 2 0 22
0 2 1 6 2 2 1 12 4 2 1 26
0 2 2 7 2 2 2 14 4 2 2 32
0 2 3 9 2 2 3 17 4 2 3 38
0 2 4 11 2 2 4 19 4 2 4 44
0 2 5 13 2 2 5 22 4 2 5 50
0 3 0 6 2 3 0 12 4 3 0 27
0 3 1 7 2 3 1 14 4 3 1 33
0 3 2 9 2 3 2 17 4 3 2 39
0 3 3 11 2 3 3 20 4 3 3 45
0 3 4 13 2 3 4 22 4 3 4 52
0 3 5 15 2 3 5 25 4 3 5 59
0 4 0 8 2 4 0 15 4 4 0 34
0 4 1 9 2 4 1 17 4 4 1 40
0 4 2 11 2 4 2 20 4 4 2 47
0 4 3 13 2 4 3 23 4 4 3 54
0 4 4 15 2 4 4 25 4 4 4 62
0 4 5 17 2 4 5 28 4 4 5 69
0 5 0 9 2 5 0 17 4 5 0 41
0 5 1 11 2 5 1 20 4 5 1 48
0 5 2 13 2 5 2 23 4 5 2 56
0 5 3 15 2 5 3 26 4 5 3 64
0 5 4 17 2 5 4 29 4 5 4 72
0 5 5 19 2 5 5 32 4 5 5 81
陽性管數(shù) 每100mL水樣中MPN 陽性管數(shù) 每100mL水樣中MPN 陽性管數(shù) 每100mL水樣中MPN
接種100mL水樣 接種10mL水樣 接種0.1mL水樣 接種100mL水樣 接種10mL水樣 接種0.1mL水樣 接種100mL水樣 接種10mL水樣 接種0.1mL水樣
1 0 0 2 3 0 0 8 5 0 0 23
1 0 1 4 3 0 1 11 5 0 1 31
1 0 2 6 3 0 2 13 5 0 2 43
1 0 3 8 3 0 3 16 5 0 3 58
1 0 4 10 3 0 4 20 5 0 4 76
1 0 5 12 3 0 5 23 5 0 5 95
1 1 0 4 3 1 0 11 5 1 0 33
1 1 1 6 3 1 1 14 5 1 1 46
1 1 2 8 3 1 2 17 5 1 2 63
1 1 3 10 3 1 3 20 5 1 3 84
1 1 4 12 3 1 4 23 5 1 4 110
1 1 5 14 3 1 5 27 5 1 5 130
1 2 0 6 3 2 0 14 5 2 0 49
1 2 1 8 3 2 1 17 5 2 1 70
1 2 2 10 3 2 2 20 5 2 2 94
1 2 3 12 3 2 3 24 5 2 3 120
1 2 4 15 3 2 4 27 5 2 4 150
1 2 5 17 3 2 5 31 5 2 5 180
1 3 0 8 3 3 0 17 5 3 0 79
1 3 1 10 3 3 1 21 5 3 1 110
1 3 2 12 3 3 2 24 5 3 2 140
1 3 3 15 3 3 3 28 5 3 3 180
1 3 4 17 3 3 4 32 5 3 4 210
1 3 5 19 3 3 5 36 5 3 5 250
1 4 0 11 3 4 0 21 5 4 0 130
1 4 1 13 3 4 1 24 5 4 1 170
1 4 2 15 3 4 2 28 5 4 2 220
1 4 3 17 3 4 3 32 5 4 3 280
1 4 4 19 3 4 4 36 5 4 4 350
1 4 5 22 3 4 5 40 5 4 5 430
1 5 0 13 3 5 0 25 5 5 0 240
1 5 1 15 3 5 1 29 5 5 1 350
1 5 2 17 3 5 2 32 5 5 2 540
1 5 3 19 3 5 3 37 5 5 3 920
1 5 4 22 3 5 4 41 5 5 4 1600
1 5 5 24 3 5 5 45 5 5 5 >1600
表A2 污泥中糞大腸菌群最可能數(shù)（MPN）檢索表
（污泥樣品接種量為3份0.1g泥樣，3份0.01g泥樣和3份0.001g泥樣）
陽性管數(shù) 每1g泥樣中MPN 陽性管數(shù) 每1g泥樣中MPN 陽性管數(shù) 每1g泥樣中MPN
接種0.1 g污樣管 接種0.01 g污樣管 接種0.001 g污樣管 接種0.1 g污樣管 接種0.01 g污樣管 接種0.001 g污樣管 接種0.1 g污樣管 接種0.01 g污樣管 接種0.001 g污樣管
0 0 0 <3 1 2 0 11 3 0 0 23
0 0 1 3 1 2 1 15 3 0 1 39
0 0 2 6 1 2 2 20 3 0 2 64
0 0 3 9 1 2 3 24 3 0 3 95
0 1 0 3 1 3 0 16 3 1 0 43
0 1 1 6.1 1 3 1 20 3 1 1 75
0 1 2 9.2 1 3 2 24 3 1 2 120
0 1 3 12 1 3 3 29 3 1 3 160
0 2 0 6.2 2 0 0 9.1 3 2 0 93
0 2 1 9.3 2 0 1 14 3 2 1 150
0 2 2 12 2 0 2 20 3 2 2 210
0 2 3 16 2 0 3 26 3 2 3 290
0 3 0 9.4 2 1 0 15 3 3 0 240
0 3 1 13 2 1 1 20 3 3 1 460
0 3 2 16 2 1 2 27 3 3 2 1100
0 3 3 19 2 1 3 34 3 3 3 >1100
1 0 0 3.6 2 2 0 21
1 0 1 7.2 2 2 1 28
1 0 2 11 2 2 2 35
1 0 3 15 2 2 3 42
1 1 0 7.3 2 3 0 29
1 1 1 11 2 3 1 36
1 1 2 15 2 3 2 44
1 1 3 19 2 3 3 53
A6 檢驗結(jié)果報告
根據(jù)糞大腸菌群MPN值，報告1L污水或1g污泥樣品中糞大腸菌群MPN值。
附錄 B
(規(guī)范性附錄)
醫(yī)療機構(gòu)污水和污泥中沙門氏菌的檢驗
B1 儀器和設備
B1.1高壓蒸汽滅菌器。
B1.2干燥滅菌箱。
B1.3培養(yǎng)箱。
B1.4恒溫水浴箱。
B1.5電爐。
B1.6天平。
B1.7滅菌平皿。
B1.8 滅菌刻度吸管。
B1.9 酒精燈。
B2 培養(yǎng)基和試劑
B2.1 亞硒酸鹽增菌液(SF增菌液)
B2.1.1 成分
胰蛋白胨(或多價胨) 10g
磷酸氫二鈉(Na2HPO3) 16g
磷酸二氫鈉(NaH2PO3) 2.5g
乳 糖 4g
亞硒酸氫鈉 4g
蒸餾水 1000mL
B2.1.2 制法
除亞硒酸氫鈉外，將以上各成分放入蒸餾水中，加熱溶化。再加入亞硒酸氫鈉，待完全溶解后，調(diào)整pH到7.0～7.1，分裝于三角燒杯內(nèi)。121℃下滅菌15min備用。
B2.2 二倍濃度亞硒酸鹽增菌液(二倍濃度SF增菌液)
B2.2.1 成分
除蒸餾水改為500mL外，其它成分同附錄B2.1.1。
B2.2.2 制法
制法同附錄B2.1.2。
B2.3 SS培養(yǎng)基
B2.3.1 基礎培養(yǎng)基
B2.3.1.1 成分
牛肉膏 5g
示胨 5g
三號膽鹽 3.5g
瓊脂 17g
蒸餾水 1000mL
B2.3.1.2 制法
將牛肉膏、示胨和膽鹽溶解于400mL蒸餾水中。將瓊脂加到600mL蒸餾水中，煮沸使其溶解。再將二者混合，121℃下滅菌15min，保存?zhèn)溆谩?br>B2.3.2 完成培養(yǎng)基
B2.3.2.1 成分
基礎培養(yǎng)基 1000mL
乳糖 10g
檸檬酸鈉 8.5g
硫代硫酸鈉 8.5g
10%檸檬酸鐵溶液 10mL
1%中性紅溶液 2.5mL
0.1%煌綠溶液 0.33mL
B2.3.2.2 制法
加熱溶化基礎培養(yǎng)基，按比例加入除中性紅和煌綠溶液以外的各成分，充分混合均勻，調(diào)整pH到7.0，加入中性紅和煌綠溶液，傾注平板。
注：制好的培養(yǎng)基宜當日使用，或保存于冰箱內(nèi)于18h內(nèi)使用?；途G溶液配好后應在10天以內(nèi)使用。
B2.4 亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基（BS培養(yǎng)基）
B2.4.1 基礎培養(yǎng)基
B2.4.1.1 成分
蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
氯化鈉 5g
瓊脂 20g
蒸餾水 1000mL
B2.4.1.2 制法
加熱溶解各成分，按每份100mL的量分裝于250mL三角瓶中，121℃下滅菌20min備用。
B2.4.2 亞硫酸鉍貯備液
B2.4.2.1 成分
檸檬酸鉍銨 2g
亞硫酸鈉 20g
磷酸氯二鈉 10g
葡萄糖 10g
蒸餾水 200mL
B2.4.2.2 制法
將檸檬酸鉍銨溶解于50mL沸水中，同時將壓硫酸鈉溶解于100mL沸水中，混合兩液并煮沸3min，趁熱加入磷酸氯二鈉攪拌至溶解。冷卻后，加入剩余的50mL葡萄糖水溶液，貯存于冰箱中。
B2.4.3 檸檬酸鐵煌綠貯備液
B2.4.3.1 成分
檸檬酸鐵 2g
煌綠（1％水溶液） 25mL
蒸餾水 200mL
B2.4.3.2 制法
將上述成分溶解于水中，盛于已滅菌的玻璃瓶內(nèi)，貯存于冰箱。
B2.4.4 完成培養(yǎng)基
B2.4.4.1 成分
基礎培養(yǎng)基 100mL
亞硫酸鉍貯備液 20mL
檸檬酸鐵煌綠貯備液 4.5mL
B2.4.4.2 制法
加熱融化基礎培養(yǎng)基并冷卻至50℃，同時分別加熱亞硫酸鉍貯備液和檸檬酸鐵煌綠貯備液至50℃。在無菌操作下將后者加入到前者去，充分混合，無菌傾入已滅菌的培養(yǎng)皿中。
B2.5 三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基（TSI培養(yǎng)基）
B2.5.1成分
蛋白胨 20g
牛肉膏 5g
乳糖 10g
蔗糖 10g
葡萄糖 1g
氯化鈉 5g
硫酸亞鐵銨 0.2g
硫代硫酸鈉 0.2g
瓊脂 12g
酚紅 0.025g
蒸餾水 1000mL
B2.5.2 制法
將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中，調(diào)pH到7.4。加入瓊脂，加熱煮沸，再加入0.2%酚紅水溶液12.5mL，搖勻。分裝試管，裝量宜多些，以便得到較高的底層。121℃下滅菌15min。放置高層斜面?zhèn)溆谩?br>B2.6 沙門氏菌診斷血清
B3 檢驗程序
檢驗程序見圖B。
B4 操作步驟
B4.1 樣品處理和增菌
B4.1.1 污水
取200mL污水，用滅菌濾膜進行抽濾。用100mL二倍濃度SF增菌液把濾膜上截留的雜質(zhì)洗脫到滅菌三角燒瓶內(nèi)，充公搖勻，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱，增菌培養(yǎng)12～24h。
注：若樣品為經(jīng)過氯消毒的污水，應在采樣后立即用5％硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。
B4.1.2 污泥
用滅菌匙稱取污泥20g，放入滅菌容器內(nèi)，加入200mL滅菌水，充分混勻，制成1：10混懸液。吸取上述1：10混懸液100mL，加入到裝有100mL二倍濃度SF增菌液的已滅菌的三角燒瓶內(nèi)，搖勻，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱，增菌培養(yǎng)24h。
注：若樣品為經(jīng)過氯消毒的污泥，應在采樣后立即用5％硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。
B4.2 平板分離
取上述增菌培養(yǎng)液，分別接種于SS培養(yǎng)基平板和BS培養(yǎng)基平板，置于37℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24～48h。觀察各平板上生長的菌落形態(tài)。
挑取在SS培養(yǎng)基平板上呈無色透明或中間有黑心，直徑1～2mm的菌落；挑取在BS培養(yǎng)基平板上呈黑色的菌落或灰綠色的可疑腸道病原菌菌落。每個平板最少挑取5個菌落，接種于TSI培養(yǎng)基中，置于37℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)18～24h。
B4.3 鑒定
B4.3.1 血清學試驗
在TSI培養(yǎng)基中，如不發(fā)酵乳糖，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，一般產(chǎn)生硫化氫，有動力者，先與沙門氏A-F群O多價血清作玻璃片凝集，凡與多價O血清凝集者，再與O因子血清凝集，以確定所屬群別，然后用H因子血清，確定血清型。雙向菌株應證實兩相的H抗原，有Vi抗原的菌型(傷寒和丙型副傷寒沙門氏菌)應用Vi因子血清檢驗。
B4.3.2 生化試驗
應進行葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖、蔗糖、靛基質(zhì)、硫化氫、動力、尿素試驗。沙門氏菌屬中除傷寒沙門氏菌和雞沙門氏菌不產(chǎn)氣外，通過發(fā)酵葡萄糖、產(chǎn)氣、均發(fā)酵甘露醇和麥芽糖(但豬沙門氏菌、雛沙門氏菌不發(fā)酵麥芽糖)，不分解乳糖、蔗糖，尿素酶和靛基質(zhì)為陰性，通常產(chǎn)生硫化氫。除雞、雛沙門氏菌和傷寒沙門氏菌的O型菌株無動力外，通常均有動力。
如遇多價O血清不凝集而一般生化反應符合上述情況時，可加做側(cè)金盞花醇、水楊素和氰化鉀試驗，沙門氏菌均為陰性。
B5 檢驗結(jié)果報告
根據(jù)檢驗結(jié)果，報告一定體積的樣品中存在或不存在沙門氏菌。
附錄 C
(規(guī)范性附錄)
醫(yī)療機構(gòu)污水及污泥中志賀氏菌的檢驗方法
C1 儀器和設備
C1.1 高壓蒸汽滅菌器
C1.2 干燥滅菌箱。
C1.3 培養(yǎng)箱。
C1.4 恒溫水浴箱。
C1.5 電爐。
C1.6 天平。
C1.7 滅菌平皿。
C1.8 滅菌刻度吸管。
C1.9 酒精燈。
C2 培養(yǎng)基和培養(yǎng)液
C2.1 革蘭氏陰性增菌液(GN增菌液)
C2.1.1 成分
胰蛋白胨(或多價胨) 20g
葡萄糖 1g
甘露醇 2g
枸櫞酸鈉 5g
去氧膽酸鈉 0.5g
磷酸氫二鉀 16g
磷酸二氫鉀 2.5g
氯化鈉 5g
蒸餾水 1000mL
C2.1.2 制法
將以上各成分加入蒸餾水中溶化，調(diào)整pH至7.0，煮沸過濾，115℃下滅菌20min。貯存于冷暗處備用。
C2.2 二倍濃度革蘭氏陰性增菌液(二倍濃度GN增菌液)
C2.2.1 成分
除蒸餾水改為500mL外，其它成分同附錄C2.1.1。
C2.2.2 制法
制法同附錄C2.1.2。
C2.3 SS培養(yǎng)基
同附錄B2.3。
C2.4 伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基(EMB培養(yǎng)基)
同附錄A2.3。
C2.5 三糖鐵瓊脂(TSI培養(yǎng)基)
同附錄B2.5。
C2.6 志賀氏菌診斷血清
C3 檢驗程序
檢驗程序見圖C。
C4 操作步驟
C4.1 樣品處理和增菌培養(yǎng)
C4.1.1 污水
取200mL污水，用滅菌濾膜進行抽濾。用100mL二倍濃度GN增菌液把濾膜上截留的雜質(zhì)洗脫到已滅菌的三角燒瓶內(nèi)，搖勻，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱，增菌培養(yǎng)6～8h。
注：若樣品為經(jīng)過氯消毒的污水，應在采樣后立即用5％硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。
C4.1.2 污泥
取污泥30g，放入滅菌容器內(nèi)，加入300mL滅菌水，充分混勻制成1：10混懸液。吸取上述1：10混懸液100mL，加入到裝有100mL二倍濃度GN增菌液的已滅菌的三角燒瓶內(nèi)，攪勻，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中，增菌培養(yǎng)6～8h。
注：若樣品為經(jīng)過氯消毒的污泥，應在采樣后立即用5％硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。
C4.2 分離
取上述增菌培養(yǎng)液，分別接種SS培養(yǎng)基平板和EMB培養(yǎng)基平板，置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。
挑取在SS培養(yǎng)基平板和EMB培養(yǎng)基平板上呈無色透明，直徑1～1.5mL的可疑腸道病原菌菌落。每個平板最少挑取5個菌落，接種于TSI培養(yǎng)基，置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24h。
挑取在TSI中，葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，無動力，不產(chǎn)生硫化氫，上層斜面乳糖不分解的菌株，可做血清學和生化試驗。
C4.3 鑒定
C4.3.1 血清學試驗
志賀氏菌屬分為四個群，先與多價血清作玻璃片凝集試驗，如為陽性，再分別與A、B、C、D群血清凝集，并進一步與分型血清做玻璃片凝集，最后確定其血清型。
C4.3.2 生化試驗
應進行葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖、蔗糖、靛基質(zhì)、硫化氫、動力、尿素試驗。志賀氏菌屬能分解葡萄糖，但不產(chǎn)氣(福氏志賀氏菌6型有時產(chǎn)生少量氣體)，一般不能分解乳糖和蔗糖，宋內(nèi)氏志賀氏菌對乳糖和蔗糖遲緩發(fā)酵產(chǎn)酸。志賀氏菌屬均不產(chǎn)生硫化氫，不分解尿素，無動力。對甘露醇、麥芽糖的發(fā)酵及靛基質(zhì)的產(chǎn)生，則因菌株不同而異。
如遇多價血清玻璃片凝集試驗為陰性，而生化反應符合上述情況時，可加做肌醇、水楊酸、V-P、櫞酸鹽、氰化鉀等試驗。志賀氏菌屬均為陰性反應。
C5 檢驗結(jié)果報告
根據(jù)檢驗結(jié)果，報告一定體積的樣品中存在或不存在志賀氏菌。
附錄 D
(標準的附錄)
醫(yī)療機構(gòu)污泥中蛔蟲卵的檢驗方法
D1 儀器和設備
D1.1 離心機。
D1.2 金屬篩：60目。
D1.3 顯微鏡。
D1.4 恒溫培養(yǎng)箱。
D1.5 高壓蒸汽滅菌器。
D1.6 冰箱。
D1.7 振蕩器。
D2 培養(yǎng)基和試劑
D2.1 3%福爾馬林溶液或3%鹽酸溶液
D2.2 飽和硝酸鈉溶液（比重1.38～1.40）或飽和氯化鈉溶液
D2.3 30%次氯酸鈉溶液
D3 檢驗程序
蛔蟲卵檢驗程序見圖D。
D4 操作步驟
D4.1 采樣及樣品處理
樣品采集后應立即送到實驗室檢驗。若不能立即檢驗時，可在100g污泥中加入5mL3%福爾馬林或3%鹽酸溶液，在4～10℃冰箱內(nèi)保存。若樣品為經(jīng)過氯消毒的污泥，應在現(xiàn)場取樣后立即用5％硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。
D4.2 蛔蟲卵收集
D4.2.1 分離
將100g污泥樣品和50mL5％氫氧化鈉溶液，分別注入三角燒杯內(nèi)，置于振蕩器上，以200～300次/min速度振蕩30min，然后靜置30min，以使蛔蟲卵不再粘附在污泥上。
D4.2.2 水洗
將上述樣品分裝在離心管內(nèi)，以2000～2500轉(zhuǎn)/min的轉(zhuǎn)速離心5min。倒去離心管上部的液體，加入容量為沉淀物10倍的蒸餾水，混勻，以2000～2500轉(zhuǎn)/min的轉(zhuǎn)速離心5min，如此反復數(shù)次，直至沉淀物上面的液體接近透明。
D4.2.3 漂浮
離心管內(nèi)注入飽和硝酸鈉溶液或飽和氯化鈉溶液，攪勻，以2000～2500轉(zhuǎn)/min的轉(zhuǎn)速離心5min。
注1：由于蛔蟲卵的相對密度小于飽和硝酸鈉溶液和飽和氯化鈉溶液的相對密度，管內(nèi)絕大多數(shù)的蛔蟲卵會浮聚在液面上。
注2：氯化鈉溶液投加量以大于沉淀物量20倍為宜。
注3：根據(jù)污泥性狀，可以調(diào)整離心轉(zhuǎn)速或時間。
D4.2.4 沉淀
反復吸取管中浮膜轉(zhuǎn)移至另一離心管中，加入10倍水量的蒸餾水，攪勻，以5000轉(zhuǎn)/min的轉(zhuǎn)速離心5min，慢慢吸去上清液。
注：由于蛔蟲卵比水的相對密度大，蛔蟲卵將沉在管底內(nèi)。
D4.3 培養(yǎng)
在離心管中，加入2～3mL無菌的生理鹽水或自來水和幾滴3％福爾馬林溶液，搖勻，轉(zhuǎn)移至試管或直接置于24～26℃恒溫箱，培養(yǎng)20天。培養(yǎng)中，若溶液量少于2mL時，應及時補充生理鹽水或自來水。
D4.4 鏡檢
培養(yǎng)后，將樣品靜置30mL后吸去試管內(nèi)上層較渾濁的液體，加入約為沉淀物兩倍量的蒸餾水或30％次氯酸鈉溶液，混勻，在顯微鏡下計數(shù)死活蛔蟲卵數(shù)。
注1：活蟲卵經(jīng)過20天的培養(yǎng)會逐漸發(fā)育到幼蟲期，而死蟲卵則在同一條件下仍然保持單細胞期或停留于某一發(fā)育階段，故可以區(qū)別。
注2：30％次氯酸鈉溶液能使蟲卵最外層蛋白質(zhì)殼逐漸溶解，便于在顯微鏡下清晰觀察卵內(nèi)的幼蟲。
D5 蛔蟲卵死亡率計算
按下式計算蛔蟲卵死亡率：
公式中：A--蛔蟲卵死亡率（%）；
m--死亡蛔蟲卵數(shù)；
n--存活蛔蟲卵數(shù)
D6 檢驗結(jié)果報告
根據(jù)檢驗結(jié)果，報告100g污泥中蛔蟲卵死亡率。
附錄 E
(規(guī)范性附錄)
醫(yī)療機構(gòu)污水和污泥中結(jié)核桿菌的檢驗方法
E1 儀器和設備
E1.1 電爐。
E1.2 恒溫水浴箱。
E1.3 高壓蒸汽滅菌器。
E1.4 濾菌器。
E1.5 離心機。
E1.6 恒溫培養(yǎng)箱。
E1.7 乙酸纖維膜：孔徑為0.3～0.7μm
E1.8 玻璃漏斗G2：孔徑為10～15μm
E1.9 玻璃漏斗G4：孔徑為3～4μm
E1.10 酒精燈
E2 培養(yǎng)基和試劑：
E2.1 改良羅氏培養(yǎng)基
E2.1.1 成分
磷酸二氫鉀 2.4g
硫酸鎂 0.24g
枸櫞酸鎂 0.6g
谷氨酸鈉 1.2g
甘油 12mL
淀粉 30g
蒸餾水 600mL
雞蛋液（包括蛋清和蛋黃） 1000mL
20%孔雀綠 20mL
E2.1.2 制法
將磷酸二氫鉀、硫酸鎂、枸櫞酸鈉、谷氨酸鈉、甘油及蒸餾水混合于燒杯內(nèi)，放在沸水浴中加熱溶解。加入淀粉繼續(xù)加熱1h，搖動使其溶解，待冷卻至50℃加雞蛋液及孔雀綠，溶解，混勻。制成斜面，保持溫度90℃，滅菌1h。
E2.2 小川氏培養(yǎng)基
E2.2.1 成分
甲液：無水磷酸二氫鉀 1g
味精 1g
蒸餾水 100mL
乙液：全蛋液 200mL
甘油 6mL
2%孔雀綠 6mL
E2.2.2 制法
甲、乙兩液混合分裝試管內(nèi)。制成斜面，保持溫度90℃滅菌1 h。
E2.3 pH為7.0的磷酸鹽緩沖液(M／15)
E2.4 10％吐溫(Tween)80水溶液加等量30％過氧化氫溶液。
E2.5 4％硫酸溶液
E3 檢驗程序
結(jié)核桿菌檢驗程序見圖E。
E4 操作步驟
E4.1 集菌
污水集菌可采用過濾離心法或直接離心法,污泥集菌可采用過濾離心法。
E4.1.1 污水樣品
過濾離心法：用經(jīng)煮沸消毒的乙酸纖維濾膜(孔徑0.3～0.7μm)抽濾，安裝嚴密后，取污水樣500mL抽濾，根據(jù)懸浮物的多少，一份水樣需更換數(shù)張濾膜，將同-份水樣濾膜集中于小燒杯內(nèi)。根據(jù)濾膜的多少用100～200mL4％硫酸溶液反復沖洗，靜置30min后，收集洗液于離心管中，3000轉(zhuǎn)／min，離心30min，棄去上清液，沉淀物中加1mL滅菌生理鹽水混合均勻后，供接種用。
直接離心法：水樣500mL，分裝于50mL或200mL滅菌離心管中，3000轉(zhuǎn)／min，離心30min。同一份水樣的沉淀物集中于試管內(nèi)，加等量4％硫酸處理30min，供接種用。如體積過大，再次離心濃縮后接種。
注：若樣品為經(jīng)過氯消毒的污水，應在采樣后立即用5％硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。
E4.1.2 污泥樣品
過濾離心法：取污泥10g加100mL蒸餾水沖洗過濾(濾紙漏斗)，再經(jīng)玻璃漏斗G2(孔徑10～15μm)和G4(孔徑3～4μm)抽濾，最后經(jīng)濾膜(孔徑0.45～0.7μm)抽濾。取下濾膜，用4%硫酸3mL，充分振搖沖洗30min。
注：若樣品為經(jīng)過氯消毒的污泥，應在采樣后立即用5％硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。
E4.2 接種
污水的集菌液：全部接種于改良羅氏培養(yǎng)基或小川氏培養(yǎng)基培養(yǎng)管內(nèi)斜面上，每支培養(yǎng)管接種0.1mL。
污泥的集菌液：吸取兩個0.1mL，分別接種于改良羅氏培養(yǎng)基或小川氏培養(yǎng)基培養(yǎng)管內(nèi)斜面上。
E4.3 培養(yǎng)
已接種的培養(yǎng)基置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。培養(yǎng)2周后開始觀察結(jié)果，每周觀察2次。一般需要培養(yǎng)8周。
分離菌株：在羅氏培養(yǎng)基上呈淡黃色或無色的粗糙型菌落，作抗酸染色，陽性者作分離傳代。分離傳代菌株如生長速度在兩周以上，則需作菌型鑒定；應用耐熱觸酶試驗和傳代培養(yǎng)于28℃培養(yǎng)2～4周，觀察是否生長，用此方法即可進行初步鑒定。
E4.4 致病力試驗
耐熱觸酶反應陰性，28℃不生長之菌落為可疑結(jié)核桿菌。于小白鼠尾靜脈接種lmg菌量(5mg／mL菌液，每只動物接種0.2mL)，死亡時觀察病變或8周后解剖臟器發(fā)現(xiàn)典型結(jié)核病變者可確認為檢出結(jié)核桿菌。其耐熱觸酶試驗方法如下：
取菌落3～5 mg分散于0.5mL磷酸鹽緩沖液中，置68℃水浴中20min后取出．冷卻后加吐溫80h和過氧化氫溶液混合液0.5mL。
發(fā)生氣泡為陽性，30min不產(chǎn)生氣泡者為陰性。人型、牛型結(jié)核桿菌，胃分枝桿菌和海魚分枝桿菌為陰性，其他非典型抗酸菌和非致病抗酸菌為陽性。人型、牛型結(jié)核桿菌在28℃培養(yǎng)不生長，胃分枝桿菌和海魚分枝桿菌28℃培養(yǎng)能生長。
E5 檢驗結(jié)果報告
根據(jù)檢驗結(jié)果，報告一定體積的樣品中存在或不存在結(jié)核桿菌。
附錄 F
(規(guī)范性附錄)
醫(yī)療機構(gòu)污水污染物（COD、BOD、SS）單位排放負荷計算方法
F1 水污染物單位排放負荷計算公式：
L= C×Q/N
式中：
L---水污染物排放單位負荷（g/床.d ）
C---污染物排放濃度（mg/L）
Q---日排水量（m3/ d）
N---床位數(shù)（床）
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