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葉綠體中色素的提取和分離-

 雅禮生物組集體備課資料 2009-04-15
高二生物:葉綠體中色素的提取和分離

1、理解障礙的突破

用“遷移法”理解本課實(shí)驗(yàn)原理及方法步驟原理。

(1)跨學(xué)科知識的遷移。

本實(shí)驗(yàn)中關(guān)于葉綠體中色素的提取和分離實(shí)驗(yàn)就同時(shí)涉及到相關(guān)的有機(jī)物的性質(zhì)、有機(jī)溶劑的特點(diǎn)、物質(zhì)的溶解度等化學(xué)知識以及物質(zhì)擴(kuò)散等物理學(xué)知識,借助于這些知識,可以更好地理解葉綠體中色素的提取和分離實(shí)驗(yàn)的原理。

葉綠體中色素提取的原理是:由于光合色素位于葉綠體中的囊狀結(jié)構(gòu)(繁注:即類囊體)上,要把它提取出來必須破壞葉表皮、細(xì)胞壁和細(xì)胞膜、葉綠體的雙層膜,所以要剪碎后加二氧化硅研磨,以便使色素充分被提取。又因?yàn)槿~綠體的色素不溶于水,但可溶于有機(jī)溶劑中,所以還要加入丙酮使色素溶解,來提取各種色素。另外還要加碳酸鈣以保護(hù)葉綠體中的色素,原因是加碳酸鈣以調(diào)節(jié)液體的pH,防止葉綠素被破壞。葉綠體中的色素溶解于有機(jī)溶劑如酒精或丙酮(相似相溶),形成色素液。

分離的原理與四種色素在層析液中的溶解度有關(guān)。層析液是一種脂溶性很強(qiáng)的有機(jī)溶劑,由于四種色素的化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)不同,因此每一種色素分子在層析液分子的作用下,克服色素分子之間的引力,向?qū)游鲆褐袛U(kuò)散的速度不同,即在層析液中的溶解度不同,因而四種色素隨層析液在濾紙條上的擴(kuò)散速度就不同,其中胡蘿卜素在層析液中的溶解度最高,擴(kuò)散速度最快,其次是葉黃素、葉綠素a,葉綠素b溶解度最低,擴(kuò)散得最慢。依據(jù)此原理使濾紙條上處于同一濾液細(xì)線上的四種色素在擴(kuò)散中分離開來。

(2)實(shí)驗(yàn)原理知識的遷移。

學(xué)習(xí)色素的提取和分離實(shí)驗(yàn),關(guān)鍵在于對實(shí)驗(yàn)原理的理解。實(shí)驗(yàn)的每一步都有其內(nèi)在的道理,理解原理不僅是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵,也是理解實(shí)驗(yàn)方法步驟的關(guān)鍵。將實(shí)驗(yàn)原理知識遷移到方法步驟中,便于理解。

①取材時(shí)要選取新鮮的顏色較深的葉片,是因?yàn)橐员闶篂V液中含較多的色素;

②研磨時(shí)加入二氧化硅的目的是為了研磨得充分,更有效地破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu);但由于二氧化硅是特別細(xì)的白色粉末,再加上控制不好用量,易過量,使濾液中含有較多的二氧化硅,而導(dǎo)致濾液顏色變淺。濾液中雜質(zhì)越多,實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象越不明顯。有實(shí)驗(yàn)證明,改用白細(xì)河沙(洗凈干燥后用)代替二氧化硅粉末,這樣研磨更充分,濾液中減少了雜質(zhì)的含量,顏色變得深綠,實(shí)驗(yàn)效果明顯。

③加入少許碳酸鈣的目的是為了防止在研磨過程中,葉綠素受到破壞。因?yàn)槿~綠素分子結(jié)構(gòu)中含有一個(gè)鎂原子,當(dāng)細(xì)胞破裂時(shí),細(xì)胞液內(nèi)有機(jī)酸中的氫可取代鎂原子而成為褐色的去鎂葉綠素,碳酸鈣可中和有機(jī)酸以防止去鎂反應(yīng)的發(fā)生。

④研磨要迅速、充分。這是因?yàn)橐皇且驗(yàn)楸菀讚]發(fā);二是為了使葉綠體完全破裂,從而能提取較多的色素;三是葉綠素極不穩(wěn)定,能被活細(xì)胞中的葉綠素酶水解而破壞。

⑤制備濾紙條時(shí),根據(jù)小孔(邊緣)擴(kuò)散原理,物質(zhì)分子沿邊緣擴(kuò)散速度要大于里邊擴(kuò)散的速度,因此要將濾紙條的一端剪去兩角,主要是為了延長邊緣長度,這樣可以使色素在濾紙條上擴(kuò)散均勻,便于觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

⑥畫線時(shí),一定要細(xì)并且直,這樣可以防止色素帶重疊,使色素分子均勻分布在一條直線上,做到擴(kuò)散起點(diǎn)一致。重復(fù)劃2~3次,是為了增加濾液細(xì)線上的色素分子數(shù)量,使實(shí)驗(yàn)效果更加明顯。

⑦分離色素時(shí),一定不要讓濾紙條上的濾液細(xì)線沒及到層析液,這是因?yàn)樯匾兹芙庥趯游鲆褐?,?dǎo)致色素帶不清晰,影響實(shí)驗(yàn)效果。

2.解題障礙的突破

(1)用“類比分析法”或“直接判斷法”解某些實(shí)驗(yàn)步驟對實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響的題。

[例1]某同學(xué)在做“葉綠體中色素的提取和分離”實(shí)驗(yàn)時(shí),操作情況如下所述:

①將5 g新鮮完整的菠菜葉,放入研缽中,加入丙酮、石英砂、碳酸鈣以后,迅速研磨,然后按要求過濾。

②用毛細(xì)吸管吸取少量濾液,沿鉛筆線處小心均勻地劃出一條濾液細(xì)線,并連續(xù)迅速地重復(fù)劃2~3次。

③把劃好細(xì)線的濾紙條插入層析液中,并不斷搖晃,以求加快色素在濾紙條上的擴(kuò)散。

但結(jié)果實(shí)驗(yàn)失敗,請指出其錯(cuò)誤所在:

(1)____________________________;

(2)____________________________;

(3)____________________________。

解析:用“類比分析法”解。對新鮮綠葉應(yīng)除去粗的葉脈后再行稱重,以增加單位重量葉片所含的葉綠素;此外,還需將葉盡量剪碎,提高研磨效果;劃濾液線時(shí),須待所劃的濾液線干燥后再重復(fù)劃線,否則會造成劃線過粗和色素濃度低的情況;濾紙條插入層析液后,由于搖晃,使層析液接觸濾液線而將色素溶解,會嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

答案:

(1)未去除粗葉脈和將葉剪碎,降低了葉綠素的提取率

(2)上一次濾液細(xì)線未干燥,即劃下一次線,使濾液線過粗或線上色素量較低

(3)由于搖晃,層析液接觸濾液線,溶解了色素

(2)用“發(fā)散思維與輻合思維結(jié)合法”解用實(shí)驗(yàn)原理進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的問題。

所謂“發(fā)散思維”主要是指從不同方面對同一問題進(jìn)行思維的方法。發(fā)散思維與創(chuàng)造力有直接聯(lián)系,是創(chuàng)造思維的中心,是測定創(chuàng)造力的重要標(biāo)志之一。創(chuàng)造活動的確需要進(jìn)行發(fā)散思維,盡可能多地聯(lián)想,提出多種假設(shè)或可能的解決辦法;然而,創(chuàng)造過程并不到此為止,接著還要根據(jù)一定的標(biāo)準(zhǔn),從中選擇一種最合適的辦法或經(jīng)過檢驗(yàn),采納某一種假設(shè),這就是輻合思維了。人的創(chuàng)造力固然要依靠發(fā)散思維,但是在創(chuàng)造活動中發(fā)散思維與輻合思維是緊密地聯(lián)系著的。

[例2]某同學(xué)設(shè)計(jì)一個(gè)“探索葉綠體中色素的提取和分離”的實(shí)驗(yàn),但缺少漏斗、試管、濾布、直尺、鉛筆,怎樣做才能使其提取的色素又多分離的效果又好?請你幫助設(shè)計(jì)一個(gè)最佳方案。

解析:用“發(fā)散思維與輻合思維結(jié)合法”解。在掌握實(shí)驗(yàn)原理的基礎(chǔ)上,可以采用不同的方法來做此實(shí)驗(yàn),進(jìn)行充分發(fā)散思維,從中選出當(dāng)時(shí)條件下的最佳方案。
答案:

方法1:在原實(shí)驗(yàn)(葉綠體中色素的提取和分離實(shí)驗(yàn))步驟的基礎(chǔ)上做如下改進(jìn):

(1)第一步加入的丙酮要少些(1~2 mL)。

(2)將研磨液(稍稠糊狀)取出,放在干凈載玻片上,用另一干凈載玻片在研磨液上平推一下,越平越好。

(3)將濾紙條剪角端在1 cm處折180°,將折處在研磨液平面上沾一下(要快而平),達(dá)到畫濾液線效果,待干燥后可重復(fù)沾2~3次(這樣由于研磨液濃度大,濾紙條上的色素線含色素多,且簡便易做)。

方法2:用粉筆分離色素

(1)按上述方法提取葉綠體色素提取液。

(2)取一支白粉筆(干燥),把一端(0.5 cm)豎直浸入葉綠體色素提取液中,充分吸液,然后讓其干燥。

(3)取一培養(yǎng)皿,注入少量95%乙醇,把上述粉筆綠色一端豎立于乙醇當(dāng)中,片刻,可以看到不同色素沿粉筆分離。

【同步達(dá)綱練習(xí)】

1.在圓形濾紙的中央,滴上葉綠體的色素濾液進(jìn)行色素分離,可看到近似同心環(huán)狀的四個(gè)色素圈,排列在最外的一個(gè)呈

A.藍(lán)綠色

B.黃綠色

C.黃色

D.橙黃色

2.葉綠體中色素的提取和分離實(shí)驗(yàn)主要證明了

A.色素分布在葉綠體囊狀結(jié)構(gòu)薄膜上

B.葉綠素含量是類胡蘿卜素的四倍

C.葉綠體中色素的種類和各種色素的顏色

D.四種色素?cái)U(kuò)散速度不同

3.某同學(xué)做“葉綠體中色素的提取和分離”實(shí)驗(yàn),在下列操作中若有失誤,請?jiān)谑д`處劃線并更正:

①將5克綠葉片剪碎放研缽中,加入少許二氧化硅和碳酸鈣,再加2 mL石油醚,并迅速充分研磨。

②在預(yù)備好的濾紙條上,距剪去兩角一厘米處用鋼筆畫橫線。

③用毛細(xì)管吸取少量濾液,沿橫線處均勻地劃出一條濾液細(xì)線,緊接重復(fù)劃2~3次。

④將層析液倒入燒杯中,然后將濾紙條劃有細(xì)線的一端朝下,輕輕插入到層析液中,注意層析液最好沒及濾紙條上濾液細(xì)線。

更正的內(nèi)容為:

①____________________________。

②____________________________。

③____________________________。

④____________________________。

若用葉色很淺的菠菜心葉做此實(shí)驗(yàn),效果很差的原因在于_________;若用菠菜的老黃葉作實(shí)驗(yàn)材料,經(jīng)層析后在濾紙條上分離出來了色素帶,但是色素帶存在缺陷,缺陷是________________________________________。

【同步達(dá)綱練習(xí)】參考答案

1、 解析:用“直接判斷法”來解。

答案:D

2.解析:用“類比分析法”來解。

答案:C

3.解析:用“類比分析法”來解。

失誤處劃線:

①將5克綠葉片剪碎放研缽中,加入少許二氧化硅和碳酸鈣,再加2 mL石油醚,并迅速充分研磨。

②在預(yù)備好的濾紙條上,距剪去兩角一厘米處用鋼筆畫橫線。

③用毛細(xì)管吸取少量濾液,沿橫線處均勻地劃出一條濾液細(xì)線,緊接重復(fù)劃2~3次。

④將層析液倒入燒杯中,然后將濾紙條劃有細(xì)線的一端朝下,輕輕插入到層析液中,注意層析液最好沒及濾紙條上濾液細(xì)線。

更正的內(nèi)容為:

答案:加2 mL丙酮    用鉛筆劃線    干燥后再劃下一次    色素線不能沒入層析液    色素含量太少    缺乏葉綠素

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